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上海博湖生物科技有限公司
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瞬时转染与稳定转染主要差异点
2023-12-18 阅读(173)
瞬时转染与稳定转染，这两者都是将目的基因转染至特定哺乳动物细胞内，进而表达得到目的蛋白。但两种方式在原理，操作流程等方面均有所区别。
一、实验原理：
瞬时转染原理：外源基因并没有转染到细胞的染色体上而是存在于游离的载体上,这样可以在短时间内获得基因的表达产物，但是随着细胞的不断分裂增殖外源基因最终会丢失，无法继续进行重组蛋白的生产。
稳定转染原理：外源基因转染至细胞染色体上，目的基因不会随着细胞传代而消失，能够长期稳定的生产目的蛋白。通过稳定转染(稳定细胞系构建)能够实现长期、稳定的生产重组蛋白。
二、操作步骤
1、瞬时转染与稳定转染所用的质粒是不同的，瞬转的质粒不需要带有抗性，而用于稳定转染的质粒一定要带有特定的抗性以便于后续的克隆株筛选。另外，两者所用的培养基及实验试剂也有所区别。
2、瞬时转染的操作比构建稳定细胞系的操作简单，构建好质粒后,经过细胞复苏、转染、细胞培养、蛋白纯化等步骤即可得到目的蛋白;而构建稳定细胞系需要先将构建好的质粒线性化，再得入培养好的哺乳动物细胞内，通过一定的转染方式实现质粒与细胞的融合，接着经过细胞池筛选、单克隆筛选、细胞传代培养等步骤才能得到稳定转染的细胞系。对稳定细胞系进行培养能够长期稳定的生产目的蛋白。
三、特点：
瞬时转染：能够快速生产得到微量至中量的重组蛋白；实验成本低；一个宿主可以带有多个拷贝，表达效率高。
稳定细胞系构建：能够长期稳定生产目的蛋白；得到稳转株之后后续生产蛋白的成本降低；
能够对基因进行基因插入、基因敲除等编辑操作。
