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上海博湖生物科技有限公司
主营产品： 高密度脂蛋白ELISA检测试剂盒,同型半胱氨酸ELISA检测试剂盒,游离脂肪酸ELISA检测试剂盒 |
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实际筛选标准血清具体方法介绍
2024-1-8 阅读(156)
现常用血清主要是牛血清、人血清、马血清等。其中牛血清来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解，故而是常用的血清。牛血清有小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清是品质高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。
血清的质量标准:
1. 内毒素标准为不高于5EU/ml
2. 总蛋白含量胎牛血清一般范围是30-40mg/ml，数值偏高偏低都会影响实验的正常进行
3. 血红蛋白标准为不高于20mg/dl
4. pH。国产血清、大多高于7.5，进口胎牛血清，大多低于7.5，根据PH的高低可用来初步鉴别血清的来源
5. 微生物。包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等，大多都能清除。大肠杆菌噬菌体无法过滤，很难全清除，但对血清质量影响不大。病原性病毒，在国产血清中几乎90%以上都存在，是影响国产血清质量的重要原因之一。
在实际筛选时，主要从血清外观和实验操作时细胞的生长状态进行。
从外观上：
1. 颜色：根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度。胎牛血清或多或少总有点溶血，因为胎牛血清凝血功能差，红细胞容易破裂；
2. 澄清度：高质量的胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低，表现为稀薄、清淡；
3. 血清沉淀：血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生，对血清质量没有影响，沉淀的产生原因跟加工生产方式、是否反复冻融密切相关，在实验操作中可能会对细胞观察产生影响。
从性能上：
1. 细胞形态，在进行血清筛选时首先观察细胞的生长形态是否产生明显变化，以及观察贴壁细胞的贴壁情况，细胞在不同血清培养中可能会出现形态上的差异；
2. 倍增时间，一般情况下会选择倍增时间短的血清，值得注意的是血清的影响会传至5代，在进行测试时，最好培养五代后进行计倍增时间的计算。
