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上海博湖生物科技有限公司
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ELISA实验中OD值偏低探讨
2024-5-13 阅读(267)
OD全称optical density，也就是光密度，也可以称为吸光度。吸光度指的是利用物质有的吸收光谱，来鉴别物质或者测定物质的含量，也就是将一束特定波长的光通过被检测物，被检测物可以将光吸收掉一部分，通过吸光度计算被检测物的浓度。一般被检测物浓度越高，吸光度的值就会越高。实验中也是利用“OD值”和被检测物的浓度之间的关系来根据吸光度。
OD值是用酶标仪测定的，其范围一般在0-3之间，也有高于3.0的，其值的大小跟孔中颜色的深浅成比例，一般颜色深，OD值就比较高，另外ELISA所测定的OD值反应的结果一般是一定稀释度的抗体效价，如果你所用的抗体稀释度很小，效价很高的话，其OD值是会很高的。
实验中OD值偏低情况分析：
第一种情况，整体的OD值偏低
可能情况分析：
1. 标准问题，标准浓度有没有提高的潜力，标准曲线的拟合方式等
2. 显色试剂问题，显色试剂是否新鲜，是否污染
3. 检测抗体，检测抗体效价是否OK，保存方法是否合适，稀释液中不含有蛋白质，基质中有影响酶活的物质等
4. 体系中是否有其他影响抗原抗体结合的物质
5. 孵育条件是否正确
6. 洗涤不能过猛，洗涤过猛也可能会造成显色偏低
第二种情况，标准曲线OK，样本的OD值很低
情况概述：操作步骤全按照要求，样本信息也适用，样本类型血清，标曲OK，但就是样本的OD值很低，不在曲线范围内。
可能情况分析：
1. 一般标曲OK，试剂盒基本没有质量问题，这个时候先去分析样品和保存方法的原因。
2. 样品是否新鲜，小爱之前看到很多论坛大咖建议用新鲜样品检测，将标准品稀释后加入血清或血浆中检测(也就是血清进一步稀释标准品)，观察检测结果，判断是否是血清中有未知物质影响。
3. 血清中成分复杂，标准蛋白的稀释液成分简单，血清中可能有450nm显色物质与板底非特异结合，或者有些非特异结合抗体的蛋白，不能洗干净，所以本底比标准样品稀释液高。
4. 适当延长显色时间。
5. 更换酶标仪，排除仪器原因。
6. 联系我们，尝试其他方法。
