 |
上海博湖生物科技有限公司
主营产品： 高密度脂蛋白ELISA检测试剂盒,同型半胱氨酸ELISA检测试剂盒,游离脂肪酸ELISA检测试剂盒 |
8
联系电话
18117197628
公司信息
- 联系人：
- 陈经理
- 电话：
- 021-57763112
- 手机：
- 18117197628
- 售后电话：
- 18117197628
- 传真：
- 86-021-57690166
- 地址：
- 上海闵行区碧泉路36弄银宵大厦B102
- 邮编：
- 200000
- 个性化：
- www.shbhbio-e.com
冷冻细胞活化操作步骤
2024-11-25 阅读(202)
细胞冷冻yell freexirig是保存微生物或动植物细胞株的常用方法。冷冻细胞到底该如何活化，一个不小心，细胞就受损了。冷冻细胞活化的正确操作步骤:
1. 冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。
2. 细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。
3.步骤：
①操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。
②自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。
③将新鲜培养基置于37 °C 水槽中回温，回温后喷以70 % 酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。
④取出冷冻管，立即放入37 °C 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化，以70%ethanol 擦拭保存管外部，移入无菌操作台内。
⑤取出0.9 ml 解冻之细胞悬浮液，缓缓加入有培养基之培养容器内(稀释比例为1:10～1:15)，混合均匀， 放入CO2 培养箱培养。另取0.1 ml 解冻细胞悬浮液作存活测试。
⑥解冻后是否立即去除冷冻保护剂(例如DMSO 或glycerol)，依细胞种类而异，一般而言，大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除，则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10 ml 培养基之离心管内，离心1,000 rpm, 5 分钟，移去上清液，加入新鲜培养基，混合均匀，放入CO2 培养箱培养。
⑦若不需立即去除冷冻保存剂，则在解冻培养后隔日更换培养基。
