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上海博湖生物科技有限公司
主营产品： 高密度脂蛋白ELISA检测试剂盒,同型半胱氨酸ELISA检测试剂盒,游离脂肪酸ELISA检测试剂盒 |
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猪转铁蛋白（TF）elisa检测试剂盒操作流程
2019-9-20 阅读(1040)
树林间积着半尺深的枯叶，风一吹，旋转着飞扬起来，又均匀地铺散下去，掩盖了那一条倾斜着盘旋到山顶的小径。接下来介绍 猪转铁蛋白(TF)elisa检测试剂盒操作流程
样品收集、处理及保存方法：
1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，10×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4）组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能
不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作步骤：
实验开始前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在37℃溶解；试剂或样品配制时，均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50?l，待测样品孔中先加样品稀释液40?l，然后再加待测样品10?l（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2、温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5、加酶：每孔加入酶标试剂50?l，空白孔除外。
6、显色：每孔先加入显色剂A50?l，再加入显色剂B50?l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.
7、终止：每孔加终止液50ml，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
