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上海博湖生物科技有限公司
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一种追踪蛋白质的传统方法
2020-2-25 阅读(2016)
实验涉及在短时间内用放射性前体标记细胞(脉冲，通常是在培养基中添加放射性的和/或半)，然后在蛋白质动力学过程中，在培养基中添加未标记的前体，细胞被允许恢复。随着带有标记前体的旧蛋白在细胞内被降解，使用未标记前体的新蛋白同时被合成。
这是一种追踪蛋白质并估计其稳定性的传统方法，除了涉及到处理放射性，这种方法在测量蛋白质半衰期时比其他药理方法具有明显的优势，在实验室中仍然经常使用。它不仅能测量蛋白质半衰期，而且如果你擅长放射自显影和亚细胞分离，还可以追踪蛋白质并确定其亚细胞定位。
在不同的时间点免疫沉淀蛋白质，用放射自显影法测量样品中的放射性。根据非放射性蛋白质取代放射性蛋白质的速度，可以确定任何蛋白质的半衰期。这种方法的另一种非放射性变异是zui近流行的bleach-chase(漂白追踪)，具体方法是目的蛋白与荧光团融合，进而通过短暂的光脉冲来漂白，漂白促使标记蛋白分为了两种亚群：荧光蛋白和非荧光蛋白，漂白后荧光恢复率与降解速率相关。
