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上海博湖生物科技有限公司
主营产品： 高密度脂蛋白ELISA检测试剂盒,同型半胱氨酸ELISA检测试剂盒,游离脂肪酸ELISA检测试剂盒 |
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进口ELISA试剂盒步骤与方法
2020-9-2 阅读(1449)
进口ELISA试剂盒使用方法：
1、组织固定于10%的福尔马林中，常规脱水包埋。
2、切片厚4μm，常规脱蜡至水。
3、用配制好的Weigert氧化剂氧化5min。
4、稍水洗。
5、用Weigert漂白剂漂白1~2min。
6、流水冲洗2min。
7、95%的乙醇稍洗。
8、切片入装有Weigert品红染色液的染色缸(加盖)中，室温下染色1～3h。
9、用酸性分化液分化至无染液脱下，约2～3s。
10、流水冲洗10min。
11、VG染色液复染30s。
12、急速用水洗一下，立刻用95%的乙醇快速分化和脱水。
13、常规脱水透明，中性树胶封固。
进口ELISA试剂盒操作步骤：
1、标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后进口ELISA试剂盒在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为300ng/L，200ng/L，100ng/L，50ng/L，25ng/L）。
2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。
3、加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
4、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
5、配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
6、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满进口ELISA试剂盒洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
7、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
8、温育：操作同3。
9、洗涤：操作同5。
10、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
11、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
12、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
