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上海博湖生物科技有限公司
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流式抗体的选择使用
2022-1-5 阅读(1011)
随着流式细胞术的日益发展，流式抗体及荧光标记产品的种类、数量也在不断增多，加上多色分析实验方案需求的增长，逐渐产生了抗体难选择、荧光难搭配等问题，如何选择合适的流式抗体，也成为了流式技术是否能成功的关键因素之1。
流式抗体的选择：
1、流式抗体本身也是抗体，所以选择流式抗体定要满足抗体选择最基本的条件：目标蛋白特异性，反应种属以及应用实验。
2、流式抗体荧光标记的方式包括直接标记和间接标记两种。在流式实验过程中，尽量减少实验工序和过程，以保证实验的真实和准确性。因此在条件允许的范围内，建议尽量用直接标记的抗体进行实验而不去做间接标记。
3、流式抗体荧光标记的选择：如果实验中检测单指标：不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。FACS Calibur仪器为例：PE ＞APC ＞PE-Cy5 ＞PerCP ＞FITC ＞PerCP-Cy5.5，通常来说，PE*，适用于弱表达抗原。FITC强度较弱，适用于强表达抗原，使用范围比较广。用户需根据检测的目标蛋白进行具体选择。如果同时检测多个指标：确认流式细胞仪能检测多少个通道：流式抗体每个通道只能选择1种荧光素。各个通道之间的荧光素可以随意搭配。如：实验者同时检测三个指标，可以在图1中绿色、黄色和红色三个通道中各选个适当的荧光素标记，FITC、PE和PE-cy5。切忌所有指标选择同个通道的荧光标记，以防止荧光的重叠和相互干扰，影响最后结果。因此，流式细胞仪的通道越多，同份样本能同时做的表面/胞内标志就越多。常用荧光标记包括FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等。
流式抗体的选择使用注意事项：
1、建议实验细胞的数量和抗体的比例要适当。细胞过量或抗体过量都可能使实验结果受影响，因此需要优化试验条件。注：不同的流式技术对抗体的需求量有较大差异，例如传统流式细胞术（采用鞘液流系统）需要1×106个细胞为起始上样量，抗体用量为10μl，而微流式细胞术则只需5×105个细胞，抗体用量减少到5μl。
2、 直标的流式抗体应该4℃避光保存，不要冷冻。
3、 尽量选择经实验验证的流式抗体，以保证实验结果。
