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ELISA试剂盒试验竞赛法的操作过程

阅读:271发布时间:2019-6-14

ELISA试剂盒抗原材猜中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞赛与固相抗原结合。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反响呈色浅于阴性反响。
ELISA试剂盒竞赛法可用于测定抗原,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞赛与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。

操作ELISA试剂盒过程如下:
1.Elisa试剂盒试验中将特异抗体与固相载体连接,形成固相抗体。洗刷。

2.待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液,使之与固相抗体反响。如受检标本中无抗原,则酶标抗原能顺畅地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原,则与酶标抗原以同样的时机与固相抗体结合,竞赛性地占去了酶标抗原与固相载体结合的时机,使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原,保温后,酶标抗原与固相抗体的结合可达充沛的量 

3.加底物显色:参考管中由于结合的酶标抗原多,故色彩深。参考管色彩深度与待测管色彩深度之差,代表受检标本抗原的量。待测管色彩越淡,表示标本中抗原含量越多。一般状况,是通过方波伏安法,检测培育系统的峰电流,通过峰电流与抗原抗体的线性关系来确定系统的检测目标的浓度。 

另一种模式为将标本与抗原一同参加到固相抗体中进行竞赛结合,洗刷后再参加酶标抗体,与结合在固相上的抗原反响。抗HBe的检测一般选用此法。 


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