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上海通蔚生物有限公司
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阅读:359发布时间:2020-1-10
血清是常用的标本,血浆一般可视为与血清同等的标本,标本引起的假阳性和假阴性成果主要是搅扰性物质所致,ELISA试剂盒分为内源性物质和外源性物质两种:
内源性物质
普遍认为大约40%的人血清标本中含有非特异性搅扰物质,能够不同程度影响检测成果。常见的搅扰物质有:类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原本身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、穿插反应物质和其它物质等。
(1)类风湿因子
人血清中IgM、IgG型类风湿因子(RF)能够与ELISA体系中的捕获抗体及酶符号二抗的FC段直接结合,然后导致假阳性。处理该状况的方法是:①用F(ab)2替代完好的IgG;②标本用联有热变性(63℃,10 min)IgG的固相吸附剂处理(将热变性IgG参加到标本稀释液中相同有效);③检测抗原时,能够用2-巯基乙醇等参加到标本稀释液中,使RF降解。
(2)补体
ELISA体系中固相一抗和符号二抗过程中,ELISA试剂盒抗体分子发作变构,其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来,使C1q 能够将二者连接起来,然后造成假阳性。处理的方法是:①用EDTA稀释标本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加热血清使C1q灭活。
(3)嗜异性抗体
人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig (s) 结合的天然嗜异性抗体,可将ELISA体系中一抗和二抗连接起来,也能造成假阳性。处理的方法是:可在标本稀释液中参加过量的动物Ig (s) ,但参加量缺乏或亚类不一起无效。
(4)嗜靶抗原的本身抗体
抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的本身抗体,ELISA试剂盒有时能与靶抗原结合形成复合物,在ELISA方法中均可搅扰抗原抗体测定成果。为防止以上状况呈现,处理的方法是:测定前需用理化方法将其解离后再测定。
(5)标本凝聚不全
在没有促凝剂和抗凝剂存在的状况下,正常血液收集后1/2~2h开始凝结,18~24h*凝结。临床查验工作中,有时为了争取时间快速检测,常在血液还未开始凝结时即强行离心别离血清,此刻的血清中仍残留部分纤维蛋白原,在ELISA试剂盒测定过程中能够形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性成果;这类状况于次日复查时因血凝已*,血清中不再有纤维蛋白原存在,故复查成果变为阴性。为防止上述搅扰作用,处理的方法是血液标本收集后有必要使其充沛凝结后再别离血清,或标本收集时用带别离胶的*或于*中参加适当的促凝剂。
(6)人ELISA试剂盒标本管中添加物质的影响
抗凝剂(如肝素,EDTA)、酶抑制剂(如NaN3可抑制ELISA体系中辣根过氧化物酶活性)及快速别离血清的别离胶等均对ELISA测定有一定搅扰作用。
经过以上的分析和总结,查验ELISA测定中呈现假阳性或假阴性等错误的成果,扫除ELISA试剂盒因素和操作因素,再有便是从标本因素进行分析,并应采取相应措施扫除搅扰,然后保证检测成果的准确性。
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