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ELISA的类型

阅读:1614发布时间:2020-5-12

1. ELISA的原理
ELISA的根底是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍坚持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保存其免疫学活性,又保存酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反响。用洗涤的办法使固相载体上构成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也经过反响而结合在固相载体上。
此刻固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反响的底物后,底物被酶催化成为有色产品,产品的量与标本中受检物质的量直接相关,故可依据呈色的深浅进行定性或定量分析。因为酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反响的结果,使测定办法到达很高的敏感度。
2. ELISA的类型
    ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定办法中有三个必要的试剂:(1)固相的抗菌素原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate);(3)酶反响的底物。依据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可规划出各种不同类型的检测办法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型:
2.1 双抗体夹心法测抗原
    一种借助酶免疫或放射免疫法检测抗原的技能。即以已知抗体包被固相载体,相继加入待测抗原和酶(或核素)标记的抗体,从而构成三明治样双抗体夹心。
双抗体夹心法是检测抗原(临床检测蛋白质等大分子抗原)zui常用的办法,操作步骤如下:
1)将特异性抗体与固相载体联结,构成固相抗体。洗涤除掉未结合的抗体及杂质。
2)加受检标本,保温反响。标本中的抗原与固相抗体结合,构成固相抗原抗体复合物。洗涤除掉其他未结合物质。
3)加酶标抗体,保温反响。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。*洗涤未结合的酶标抗体。此刻固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
4)加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产品。经过比色,测知标本中抗原的量。
2.2双抗原夹心法测抗体
    反响形式与双抗体夹心法相似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原替代酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备,应依据抗原结构的不同,寻找适宜的标记办法。

 


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