肢体远隔缺血预处理和*后处理的联合应用对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用及机制的实验研究
摘要：一部分肢体远隔缺血预处理和*后处理的联合应用对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用目的通过建立大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型,观察模型在缺血再灌注期间血流动为学改变、心脏收缩与舒张功能改变、血清心肌生物学标志物及心肌梗死面积等指标,探索肢体远隔缺血预处理和*后处理对心肌缺血再灌注损伤的协同保护作用效果。方法成年SD大鼠50只,建立急性大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型(缺血30 min,再灌注2 h)。随机分为空白对照组(CON组)、缺血再灌注组(I/R组)、肢体远隔缺血预处理组(RIPC组)、elisa试剂盒*后处理组(SPC组)和肢体远隔缺血预处理和*后处理联合应用组(RIPC+SPC组)。采用Powerlab数据采集分析系统监测血流动力学(HR、MAP和RPP),心律失常情况并进行评分及心功能指标(LVSP、LVDEP、+dp/dtmax、-dp/dtmax),采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌生物学指标(hs-cTnT、cTnT、CK-MB)血清浓度,采用三苯四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死范围。结果与I/R组比较,RIPC组、SPC组和RIPC+SPC组的血流动力学(HR、MAP和RPP)更加稳定,心律失常发生率及评分明显降低,心脏收缩与舒张功能明显增强,血清hs-cTnT、cTnT、CK-MB浓度明显降低,心肌梗死面积显著缩小,差异均有统计学意义。与RIPC组或SPC组比较,RIPC+SPC组血流动力学(HR、MAP和RPP)进一步稳定,心律失常发生率及评分进一步降低,心脏收缩与舒张功能进一步增强,血清hs-cTnT、cTnT、CK-MB浓度进一步降低,心肌梗死面积进一步缩小,差异均有统计学意义。结论采用大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型,联合应用肢体远隔缺血预处理和*后处理,可获得协同性的心肌保护作用,血流动力学更加稳定,心律失常明显减少、心功能明显改善。第二部分肢体远隔缺血预处理和*后处理的联合应用对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护机制目的通过建立大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型,探索肢体远隔缺血预处理和*后处理通过炎症信号通路和凋亡途径参与对心肌保护的作用机制。方法成年SD大鼠50只,建立急性大鼠在体心肌I/R损伤模型。随机分为空白对照组(CON组)、缺血再灌注组(I/R组)、肢体远隔缺血预处理组(RIPC组)、*后处理组(SPC组)和肢体远隔缺血预处理和*后处理联合应用组(RIPC+SPC组)肢体远隔缺血预处理和*后处理联合应用组(RIPC+SPC组)。采用H&E染色检测心肌组织病理学改变;采用ELISA方法检测血清炎症细胞因子(IL-8,IL-6和TNF-α)含量;采用qRT-PCR检测TLR4/MyD88/NF-κB(p65)炎症通路;通过TUNEL法检测心肌细胞Bcl-2/Caspase-3/PARP调亡途径。结果与I/R组比较,RIPC组、SPC组和RIPC+SPC组的心肌细胞炎症反应明显减轻;炎性细胞因子(IL-6、IL-8和TNF-α)表达显著下降;炎性介质(MyD88、NF-κB(p65))的mRNA表达明显下调,而抗炎因子IKB-α表达上调。抑/促凋亡基因(Bcl-2/Bax)比值显著升高,C-Caspase-3蛋白表达显著降低,而PARP蛋白表达明显提高。与RIPC组或SPC组比较,RIPC+SPC组心肌细胞炎症反应进一步减轻;炎性细胞因子(IL-6、IL-8和TNF-α)表达进一步下降;炎性介质(MyD88、NF-κB(p65))的mRNA表达进一步下调,而抗炎因子IKB-α表达进一步上调。抑/促凋亡基因(Bcl-2/Bax)比值进一步升高,C-Caspase-3蛋白表达进一步降低,而PARP蛋白表达进一步提高。结论1、肢体远隔缺血预处理和*后处理的联合应用,可显著抑制心肌细胞炎症反应和调亡,减轻心肌组织炎症和细胞凋亡,心肌组织结构和细胞形态明显改善。elisa试剂盒2、肢体远隔缺血预处理和*后处理通过TLR4/MyD88/NF-κB(p65)炎症信号转导通路减轻心肌细胞炎症反应和通过Bcl-2/Caspase-3/PARP凋亡信号转导通路减少心肌细胞凋亡,共同减轻心肌缺血再灌注损伤,从而保护心肌组织。
