| 上海宇淳生物科技有限公司
主营产品： PCR八联排管,sigma现货,Cy7试剂 |
公司信息
人I型胶原（Col-I）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒
2020-12-28 阅读(785)
l 本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中I型胶原(Col-I)的含量。
l 有效期：6个月
l 保存条件：2-8℃
使用目的
本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中I型胶原(Col-I)的含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人I型胶原(Col-I)水平。用纯化的人I型胶原(Col-I)抗
体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入I型胶原(Col-I)，再与HRP标记的I型胶原(Col-I)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的I型胶原(Col-I)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人I型胶原(Col-I)浓度。
注意事项
l 本试剂盒仅用于科研，不得用于医学诊断。
l 使用试剂盒，请仔细阅读说明书，以试剂盒内的说明书为准，请务必理解说明书内容。
l 酶标包被板属于可拆型，开封后如未用完，板条应装入铝箔袋密封并2-8°C保存。
l 加样样本和试剂应尽快完成。
l 避免实验过程中酶标板干燥；清洗后尽快加试剂。
l 实验开始，所有试剂应平衡到室温 (21-26°C) 后方可进行。温度会影响吸光度值，但不影响样本值。
l 切忌用口加样，以免试剂和样本粘到皮肤和粘膜上。
l 不要在处理样本或试剂的区域抽烟、吃东西、喝酒或化妆。
l 操作时带次性手套，微生物的污染会影响实验结果的正确性。
l 操作应按照家规定的安全条列进行。
l 过期的试剂盒切勿再使用。
l TMB 底物对皮肤有刺激性，不慎ru眼，立即用大量水冲洗，皮肤上不慎接触到也应立即用肥皂， 并用大量的水冲洗。试验中被污染的物品在下次使用应尽快清洗。
试剂盒组成
9. 终止液6ml×1瓶
10. 酶标试剂6ml×1瓶
11. 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶
需要而未提供的试剂和器材
l 吸光度值在450nm波长下检测的酶标仪。
l 1-2ml的加样器。
l 100 ml和1L的量筒。
l 吸水纸。
l 37°C 恒温箱。
l 蒸馏水或去离子水。
l 数据分析和绘图软件，图纸。
l 标准和样品稀释的试管。
储存条件
u 有效期内的试剂如开封后未用完，请2-8°C 保存。
u 过期的试剂请不要用，打开后的试剂2-8°C 保存。
u 酶标包被板必须2-8°C 保存，如有未用完的酶标包被板，打开的铝箔袋须密封并2-8°C 保存。
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
样本处理及要求
1. 血清-用采血管收集血液，室温血液自然凝固30分钟，1000 xg离心15分钟左右，收集上清，尽早
进行实验，或者分装后-20°C 或 -80°C 保存。
2. 血浆-收集好的血浆根据要求选择EDTA或者柠檬酸钠作为抗凝剂，2-8°C 1000 xg离心15分钟左右，30分钟内收集好，-20°C 或 -80°C 保存，避免反复冻融。
3. 细胞上清及相关液体-收集好的样本离心后应尽快实验，或者分装后-20°C 或 -80°C 保存，避免反复冻融。
操作步骤
u 注意事项
l 所有试剂和样本使用必须在室温下平衡，混匀试剂时不应起泡沫。
l 旦实验开始，各操作步骤都应尽快完成。
l 避免重复使用手中的吸头和试管，以免交叉污染。
l 般情况，酶的反应与时间和温度成正比。
u 操作步骤
1. 标准品的稀释：准备小试管 6 只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液 100ul，然后取原浓度标准品 100ul 加入只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取 100ul 加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取 100ul 加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取 100ul 加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取 100ul， 弃掉。第六只试管作为 0 号标准品。稀释后各管浓度分别是：4000pg/ml,2000pg/ml,1000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,0pg/ml,。
在酶标包被板上设标准品孔，依次加入不同浓度的标准品 50ul（建议每个浓度做 2 个平行孔）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品、酶标试剂及生物素标记的抗 Col-I 抗体，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品 40μl，然后再加生物素标记的抗 Col-I 抗体 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
4. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
5. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 后弃去，如此重复 5 次， 拍干。
7. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 分钟。
8. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
9. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15
分钟以内进行。
10. 检测范围：50pg/ml-4000pg/ml。
11. 灵敏度：≤10pg/ml。
实验结果计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，即为样品的实际浓度。
