细胞说明书-技术文章-上海宇淳生物科技有限公司

仅供科研使用，不可用于临床诊断和治疗

冻存细胞接收后的处理：

1）干冰运输，收到细胞后推荐直接复苏，转入液氮暂存可能导致细胞复苏率降低；

2）收到细胞后，若发现干冰已经*挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联xi。

复苏细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。

2）75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。

3）建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。

4）如您收到细胞3天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。

注：发货用培养基不可再次用来培养细胞

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入1ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③细胞消化0.5-2min（具体时间根据镜下形态判断），显微镜下观察细胞，细胞回缩，即将脱壁而未脱壁时（可用枪轻轻吹打确认细胞是否脱壁），加入培养基终止消化（若消化过度可能会对细胞存活率产生较大影响）；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

注：di一次传代推荐1:2传代，后续可根据细胞生长以及客户需求自行确定。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀；

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入T25培养瓶或60mm培养皿中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

②细胞消化0.5-2min（具体时间根据镜下形态判断），显微镜下观察细胞，细胞回缩，即将脱壁而未脱壁时（可用枪轻轻吹打确认细胞是否脱壁），加入培养基终止消化（若消化过度可能会对细胞存活率产生较大影响）；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。