技术文献分享-ELISA试剂盒细节要求

　　◆ELISA需要遵循的几个细节要点：

　　1、抗原或抗体能吸附于固相载体表面，并保持其免疫学活性;

　　2、抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;

　　3、酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，可根据已知浓度的抗原或抗体的颜色反应的深浅绘制标准曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。

　　◆注意事项：

　　1、标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。

　　2、冻结标本溶解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠混合，不要在混匀器上强烈震荡。

　　3、浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤，澄清后再检测。

　　4、反复冻融会使蛋白效价降低，所以代测样本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。

　　除了以上内容，在ELISA试剂盒细节中，稀释前、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样前也须摇匀，以保证试验的均一性。

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