脂蛋白酯酶(LPL)＆肝脂酶(HL)检测试剂盒

测定意义：

LPL（lipoprotein lipase）存在于肝外组织毛细血管内皮细胞表面，催化血浆中乳糜微粒(CM)和极低密度脂蛋白(VLDL)中甘油三酯(TG)的水解，在CM及VLDL的降解中发挥重要作用。HL（hepatic lipase）仅存在于肝内皮细胞表面，在中密度脂蛋白(IDL)和高密度脂蛋白(HDL)代谢中起重要作用。LPL 和HL活性降低，可引起高甘油三酯血症。在高脂血症、动脉粥样硬化的发病机理及脂蛋白代谢研究中，常常需要测定LPL及HL活性。

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、微量注射器、可见分光光度计/、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、肝素钠、氯fang（三氯jia 烷）、无水乙醇和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1瓶，室温保存。

试剂三：自备。实验前1 d，在10 mL试剂瓶中加入4.8 mL正庚烷，0.2 mL无水甲醇，5 mL氯fang（自备），盖紧后混匀，室温保存。

试剂四：液体×1瓶，室温保存。

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前向试剂瓶中加入5 mL无水乙醇，充分溶解。

标准品：粉剂×1瓶，室温保存。临用前向试剂瓶中加入7.8 mL氯fang充分溶解，即为500μmol/L的棕榈酸标准溶液。

粗酶液提取：

1、血液中LPL与HL活性测定：按动物体重，150U/kg肝素钠溶液静脉注射，20min后取血液，即下表中粗酶液，待测。

2、组织中LPL与HL活性测定：组织用生理盐水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，称取约0.1 g样品，加入1 mL生理盐水，冰浴匀浆，8000rpm，4℃离心10min，取上清液，即粗酶液，待测。

LPL和HL测定操作：

1. 分光光度计预热30 min以上，调节波长到550 nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取带盖 玻璃试管，加入2 μL蒸馏水，100μL试剂三，40 μL试剂四，40μL试剂五，盖紧后充分震荡混匀（2min），倒入微量石英比色皿/96孔板，静置15min，于550nm光吸收，记为A空白管。

3. 标准管：取带盖 玻璃试管，加入2 μL标准液，100μL试剂三，40 μL试剂四，40μL试剂五，盖紧后充分震荡混匀（2min），倒入微量石英比色皿/96孔板，静置15min，于550nm光吸收，记为A标准管。

4. 总脂酶测定管：取带盖玻璃试管，加入10 μL粗酶液，100μL蒸馏水，100μL试剂二，盖紧后混匀；37℃水浴准确保温60min；吸取2μL上述溶液，加入另一个0.5mL EP管，加入100μL试剂三，40 μL试剂四，40μL试剂五，盖紧后充分震荡混匀（2min），倒入微量石英比色皿/96孔板，静置15min，于550nm光吸收，记为A总脂酶管。

5. 肝脂酶测定管：取带盖玻璃试管，加入10 μL粗酶液，100μL试剂一，100μL试剂二，盖紧后混匀；37℃水浴准确保温60min；吸取2μL上述溶液，加入另一个0.5mL EP管，加入100μL试剂三，40 μL试剂四，40μL试剂五，盖紧后充分震荡混匀（2min），倒入微量石英比色皿/96孔板，静置15min，于550nm光吸收，记为A肝脂酶管。

脂蛋白酯酶(LPL)＆肝脂酶(HL)检测试剂盒