采用课题组已构建的携带人白介素2-人血清白蛋白融合蛋白（rhIL-2-HSA）基因的重组毕赤酵母Pichia pastoris GS115进行rhIL-2-HSA的分离纯化研究.发酵上清液经超滤浓缩,Blue Sepharose亲和层析,Octyl Sepharose疏水层析和DEAE Sepharose离子交换层析纯化获得较高纯度的目的产物,SDS-PAGE检测为单一条带.Western Blo
人白介素2（IL-2）抗原纯品说明书
首先感谢您选择深圳市优品生物科技有限公司，我司为您提供优质的免疫学试剂，在您使用本产品前，请认真阅读说明书，不清楚之处，请咨询技术人员解答，这对您顺利完成实验很有帮助。
名 称：人白介素2（IL-2）抗原纯品。
目 录 号：YP100003
浓 度：1mg/ml
缓 冲 液：0.01mol/L的PBS、pH：7.2、0.2%Procline-300、50%甘油。
制备方法： 大肠杆菌重组蛋白。
纯化方法：亲和纯化。
应用范围：用于细胞培养的刺激剂；用于ELISA、CLIA、WB、IHC等免疫检测。
产品纯度：不低于总蛋白的90%。
储存方法：存放在-20℃。
注意事项：避免反复冻融。
有效期限：请您在管体注明有效期内使用。
使用建议：本产品可以用于细胞水平、动物水平、蛋白水平的免疫学反应相关实验。
在本实验室之前的研究中,利用毕赤酵母对人白介素-2(IL-2)和人血清白蛋白(HSA)融合蛋白进行表达,分别将IL-2连在HSA的N-端(IL-2-HSA)和C-端(HSA-IL-2)得到的融合蛋白都具有良好的生物学活性,其半衰期也由IL-2单体的6.9 min延长至13.24 h.但在研究中发现,毕赤酵母在表达HSA融合蛋白时存在蛋白降解,产物不均一和过度糖基化等现象,导致分离纯化困难,活性下降以及半衰期缩短等问题,这些不利因素限制了毕赤酵母在表达IL-2融合蛋白中的应用.目前中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)已成功应用于多种药物蛋白的表达,因此本研究将IL-2和HSA的融合蛋白在CHO细胞中进行表达,对筛选得到的工程细胞株的生长状态和蛋白表达进行了检测,同时对融合蛋白的分离纯化策略和生物活性进行了分析.本研究利用基因工程技术构建两种不同连接方式的融合蛋白表达质粒,并通过电转染的方法分别转入CHO细胞中,经过四次克隆筛选和摇瓶终筛获得了高效表达HSA-IL-2融合蛋白的细胞株CHO/p MH3-HSA-IL-2/9和表达IL-2-HSA融合蛋白的细胞株CHO/p MH3-IL-2-HSA/8.进行Western blot检测后发现两种融合蛋白都具有HSA和IL-2双重免疫原性,CTLL-2/MTT法检测发现,筛选得到的细胞株分泌表达的融合蛋白都具有一定的生物活性.对筛选得到的细胞株进行3 L摇瓶流加培养,CHO/p M
在本实验室之前的研究中,利用毕赤酵母对人白介素-2(IL-2)和人血清白蛋白(HSA)融合蛋白进行表达,分别将IL-2连在HSA的N-端(IL-2-HSA)和C-端(HSA-IL-2)得到的融合蛋白都具有良好的生物学活性,其半衰期也由IL-2单体的6.9 min延长至13.24 h.但在研究中发现,毕赤酵母在表达HSA融合蛋白时存在蛋白降解,产物不均一和过度糖基化等现象,导致分离纯化困难,活性下降以及半衰期缩短等问题,这些不利因素限制了毕赤酵母在表达IL-2融合蛋白中的应用.目前中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)已成功应用于多种药物蛋白的表达,因此本研究将IL-2和HSA的融合蛋白在CHO细胞中进行表达,对筛选得到的工程细胞株的生长状态和蛋白表达进行了检测,同时对融合蛋白的分离纯化策略和生物活性进行了分析.本研究利用基因工程技术构建两种不同连接方式的融合蛋白表达质粒,并通过电转染的方法分别转入CHO细胞中,经过四次克隆筛选和摇瓶终筛获得了高效表达HSA-IL-2融合蛋白的细胞株CHO/p MH3-HSA-IL-2/9和表达IL-2-HSA融合蛋白的细胞株CHO/p MH3-IL-2-HSA/8.进行Western blot检测后发现两种融合蛋白都具有HSA和IL-2双重免疫原性,CTLL-2/MTT法检测发现,筛选得到的细胞株分泌表达的融合蛋白都具有一定的生物活性.对筛选得到的细胞株进行3 L摇瓶流加培养,CHO/p M
