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伊莱博生物科技（上海）有限公司
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质粒转化
| 参考价 | ￥ 300 |
| 订货量 | 10件 |
具体成交价以合同协议为准
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- 厂商性质 其他
- 所在地 上海市
更新时间：2024-03-07 15:20:46浏览次数：197
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将质粒 DNA 导入细菌的过程称为转化（ Transformation ）。此感受态细菌细胞在 CaCl 2 低渗溶液中膨胀为球状（感受态细菌的制备，见前）。质粒 DNA 与 CaCl 2 形成抗 DNase 羟基 - 磷酸钙复合物黏附于细菌表面，经 42℃ 短时间热冲击处理，促进细胞吸收 DNA 复合物。在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分lie增殖。被转化的细菌中，外源基因得到表达。在选择性培养平板上，可选出所需的转化子（即含有质粒 DNA 的细菌）。钙处理的感受态细胞，一般每微克 DNA 能获得 10 5 ～ 10 6 个转化子。除化学方法转化细菌外，还有电穿孔法（ Electroporation ），其转化率可高达 10 9 ～ 10 10 个转化子 /μg 质粒 DNA 。
二、实验器材
1.培养皿
2.恒温培养箱
三、试剂
1.LB 培养基
2.选择性 LB 琼脂培养平板（含氨苄qms，终浓度为 50μg/ml ）
3.氨苄qms 100 mg/ml
4.宿主细菌：经 100 mmol/L CaCl 2 处理的感受态细菌 DH5α
四、操作步骤
1、取50μL大肠杆菌感受态细胞，加入适量质粒（体积不得超过4μL）冰浴30min后42℃热激90s ，马上放回冰上，冰浴2min ；
2、加400μLLB培养基，于37℃摇床慢摇振荡培养45-60min；
3、取50-100μL涂在含有氨苄qms（100μg/mL）的LB固体培养基上，37℃倒置培养过夜。
