北京众力挽生物科技有限公司

蛋白纯化注意事项

时间:2022-3-21阅读:97
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1. 选择表达载体时,要根据所表达蛋白的最终应用考虑。如为方便纯化,可选择融合表达;如为获得天然蛋白,可选择非融合表达。
2. 融合表达时在选择外源DNA同载体分子连接反应时,对转录和转译过程中密码结构的阅读不能发生干扰。

3. 菌液OD值要小于1,否则细胞太浓太老,不易破碎,且质粒易丢失。

4. 诱导时间做一个梯度,不同蛋白诱导时间需摸索。

5. 诱导温度适当摸索:25、30℃。

6. IPTG浓度:一般在1 mM 以内,可适当摸索。

7. 超声条件可视实际情况改变,只要使菌体裂解充分即可,即菌液清亮不粘稠。

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