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江苏肯尔菲实验仪器贸易有限公司
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更新时间:2024-09-20 12:12:36浏览次数:193
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一滴血做流式,选择guava微流式技术
超微量样本检测T淋巴细胞亚群变化
常规流式实验至少需要100μl 样品(1×106个细胞)完成一次检测,无法满足“一滴血做流式"的需要。
默克密理博的“guava微流式技术"成功突破此瓶颈,以10μl超微量上样量(1×105个细胞)
完成常见流式细胞学实验。不仅大大节省了细胞量、药物、抗体,也有效地降低了实验者工作负担。
现在,以常规样品量(100μl)至少可以完成10次实验,从而开拓新实验设计思路,加速科研成果的诞生!
“使用(Guava)流式细胞仪使得样本量减少90%以上,同时每份样本的检测时间从120s降低至10s"。
——Bruce K. Patterson 个展开个体化治疗研发的
Invirion诊断公司与Evanston西北健康公司和斯坦福大学医学院的一项以宫颈癌检测的联合研究报告中提到(见文献)
“目前为止,很少有研究者对同一只小鼠进行纵向的疾病进程跟踪研究,这是因为传统的流式细胞仪
无法支持超微样本量的检测。Guava微流式细胞分析仪使得对慢性免疫疾病发展进行纵向跟踪的实验设计成为现实" 。
——美国运动医学专家,MED SCI SPORT EXER杂志评委,
休斯顿大学生理学教授Dr. McFarlin在Immunology Method发表论文提到。(见文献)
以较为常见的T淋巴细胞亚群检测为例
T淋巴细胞亚群在许多临床疾病中可发生异常改变,特别是免疫功能受损的病人。测定T淋巴细胞亚群变化
对了解疾病的发病机制、指导临床治疗、控制疾病的发生发展均有重要意义。根据不同的表面标志物可以
对T细胞进行分群,其中CD3+/CD4+为辅助性T细胞,CD3+/CD8+为杀伤性T细胞。使用流式细胞仪和荧
光标记抗体,可以对人全血标本中T细胞CD3/CD4进行分群和计数。
实验流程
在96孔板中加入10ul CD8-FITC/CD4-PE/CD3-PECY5 预混试剂,或者根据抗体说明书加入相应体积抗体;
在每孔中加入10ul抗凝全血(约1×105细胞);
用枪头上下吹打混匀试剂和全血(确保没有血样粘附在孔壁上影响实验结果);
室温(18-25℃)避光孵育20min;
每孔中加入180ul 1X Lysing Solution或相应体积的裂解试剂;
立即用枪头上下吹打混匀每孔;
室温(18-25℃)避光孵育15min;
尽快用流式细胞仪获取结果(3h内进行检测)


结果可见:通过CD3,CD4,CD8的检测指标对全血样本中T淋巴细胞进行正确区分,并同时报告Th细胞和Tc细胞的计数结果。
证明10μl的样本借助“guava微流式"技术同样能够完成流式检测,并且所获得的数据具有统计学意义,准确区分了T淋巴细胞各个亚群。
*引用对应文献
1 Polina, R., et al., Rapid, high throughput determination of cervical cytology specimen adequacy using a capillary-based cytometer.
Cytometry B Clin Cytom, 2008. 74(2): p. 133-6.
2 Breslin., W.L., et al., Mouse blood monocytes: Standardizing their identification and analysis using CD115
.Journal of Immunological Methods, 2011.