ELISA试剂盒实验条件选择

ELISA试剂盒，是通过酶联免疫吸附反应进行实验来检测特定物质的试剂盒,试剂盒中会有不同浓度的标准样品，在酶标条中通过固相的抗原或抗体，酶标记的抗原或抗体，酶作用的底物反应可形成标准曲线,从而进行试验样品的测定。

在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括以下几点：

1、固相载体的选择。

许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一，据此判明其吸附性能是否良好。

2、包被抗体(或抗原)的选择。

将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好，吸附时-般要求pH在9.0-9.6之间。吸附温度、时间及其蛋白量也有一定的影响，一般多采用4℃18-24h。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.lμg/mL、1.0μg/mL和10μg/mL等)进行包被后，在其他实验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说，通常为1-10μg/ mL。

3、酶标记抗体工作浓度的选择。

首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部分)。然后再固定其他条件或采取“方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

4、酶的底物及供氢体的选择。

对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显的显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护，有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间以10-30min为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

ELISA试剂盒实验具备的以下环境条件：
1. 为推迟光学部件的老化，应避免阳光直射。
2. 操作环境温度应在15℃至40℃之间，环境湿度在15%~85%之间。
3. 仪器应放置在噪音低于40分贝的环境下。
4. 操作时电压应坚持稳定。
5. 操作环境空气清洗，避免水汽、烟尘。
6. 坚持枯燥、洁净、水平的作业台面，以及满足的操作空间。
7. 仪器应放置在无强磁场和烦扰电压的方位。