PCR的血液标本保存之单个核细胞分离出来方法

PCR的血液标本保存最好是用淋巴细胞分离液把单个核细胞分离出来，然后-80℃保存。

外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的分离是免疫学研究中的一项基本技术。单个核细胞分离出来方法：

1.静脉取血2ml，加入含肝素溶液(10～50u／m1血样本)的试管中，混匀，使血液抗

凝。用pH7.2 Hanks液将抗凝血稀释1倍。

2.吸取2ml淋巴细胞分层液置于刻度离心管中，然后将离心管倾斜45O角，用毛细滴管将稀释的全血沿管壁缓慢加至分离液上面，应注意保持两者界面清晰。

3.在18℃～20℃下，用水平离心机以2000r/min离心20min。离心后细胞分布如图。

 4.用毛细吸管轻轻插到混浊带，沿管壁轻轻吸出此层细胞，移入另一支离心管中。即要吸取所有单个核细胞，又要避免吸取过多的分层液或血浆，以免混入其他细胞成分。

5.用Hanks液洗涤细胞3次。第一次2000r/min ，10 min；第2～3 次1500r/min ，10 min，可去掉大部分混杂的血小板。

6.将沉淀细胞悬于培养基中备用。

 注意事项：

    1、实验所用玻璃器皿应该洁净。如果制备的单个核细胞悬液用于细胞培养时，上述操作过程都要在无菌条件下进行，所用器材、试剂都应为无菌。

    2、实验中的细胞得率与室温及分层液比重等有关。分层液应避光4℃保存。

3、往淋巴细胞分层液中加入稀释全血时，不得将血液冲入分离液中，须保持两层液体的清晰界面。