糖原合成酶（GCS）试剂盒微量法测定步骤

      糖原合成酶（Glycogen synthase，GCS）试剂盒测定原理：GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UDP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映GCS活性。

测定步骤：

1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 

2、 工作液的配制：临用前将试剂三和试剂四转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、 试剂五的配制：临用前在试剂五中加入1mL试剂二充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

4、 将工作液和试剂五置于37℃预热5分钟。

5、 在1mL微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂五和180μL工作液，立即混匀，记录340nm处初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。

注意：在该试剂盒中，若ΔA大于0.1，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA小于0.1可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。

测定意义：

GCS（EC 2.4.1.11）催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP，以α-1，4-糖苷键相连延长糖链，是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶，是胰岛素作用的主要靶酶，对糖代谢的调节和血糖稳态的维持具有重要作用。