分子生物学的操作步骤的特点

分子生物学原理：

细菌体中含有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色，可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋白的分子量，可筛选阳性表达的重组体。

分子生物学操作步骤：

1．取出试剂盒室温平衡30min，取出血样放至室温。

2．配标准品：取150uL标准品加入150uL标准品稀释液稀释，依次稀释5次。

3．加样：分别于各反应孔中加入标准品50uL，样品40UL，标准品做复孔，样品做3孔。

4．分别于样品孔中加入10UL抗体。

5．标准品和样品孔中分别加入50uL链酶亲和素-HRP，盖上封板膜,轻轻震荡混匀，37℃温育60min。

6．配洗涤液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

7．洗涤：小心揭开封板膜，弃去液体，甩干，每孔分子生物学加200uL 洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干。

8．显色：每孔先加入显色剂A 50uL，再加显色剂B50uL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色6min。

9．终止：每孔加入终止液50uL，终止反应（此时蓝色立即转为黄色）。

10．测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度。测定应在加终止液10min之内进行。

分子生物学特点：

一、高效、灵敏、特异的抗体。

二、稳定的重复性和可靠性。

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体。

四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型。

五、节省实验经费。