KLK 8检测试剂盒 返回列表页

实验原理：
是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法：
1、   血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、   血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、   细胞上清液---1000×g离心10分钟除颗粒和聚合物。
4、   组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5、   保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

标本要求：
1. 血清：：温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2. 血浆：根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
3. 尿液：无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，或组织蛋白萃取试剂，用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：
①标本因素；
②试剂因素；
③操作因素。
下面就一些常见ELISA操作过程中的问题一一分析。
1．样品稀释 酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应，如果血清不稀释，不可避免会产生很强的非特异性反应，出现假阳性。因此，国外检测血清抗体的试剂盒，均规定将血清稀释至适当的倍数，以降低非特异性反应，使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定，以保证试验的灵敏度和特异性。但是，有些用户未能严格按使用说明书操作，如某些产品应取10μl样品进行稀释，个别用户取5μl甚至1μl样品进行稀释，由于吸嘴上不可避免地沾有样品以及微量移液器的精度不够，因此造成样品稀释倍数不准确，检测结果出现问题。
2．试剂盒平衡 试剂盒中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温（约25℃），一般需在室温放置20～30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够，样品孵育时间相对缩短，ELISA反应不够充分。冬季室温低，可将试剂盒置37℃温箱20分钟。 
3．样品和试剂的混匀 稀释前、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样前也须摇匀，以保证试验的均一性。
下列是公司是正在的产品：

单核细胞趋化蛋白4试剂盒Anti-RNAHelicaseAantibody

单核细胞趋化蛋白3试剂盒Anti-DHX37antibody

单核细胞趋化蛋白2试剂盒Anti-PRP16antibody

单核细胞趋化蛋白1试剂盒Anti-Insig1antibody

单纯疱疹病毒抗原-1试剂盒Anti-KDM4A/JHDM3A/JMJD2Aantibody

单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体IgM试剂盒Anti-RCC2antibody

单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体IgG试剂盒Anti-RCC2antibody

单纯疱疹病毒Ⅰ型试剂盒RecombinanthumanLynprotein

单纯疱疹病毒Ⅰ型试剂盒Anti-KIF20Aantibody

单纯疱疹病毒Ⅰ+Ⅱ型试剂盒RecombinantHumanCAB39/MO25protein

单纯疱疹病毒Ⅰ+Ⅱ型试剂盒Anti-PPM1Gantibody

单胺氧化酶试剂盒Anti-TIPRLantibody

带3蛋白试剂盒Anti-Cbx8antibody

大疱性类天疱疮抗体试剂盒Anti-KDM3B/JMJD1Bantibody

大内皮素试剂盒Anti-ARTD10antibody
KLK 8检测试剂盒 Ⅱ型胶原交联C端肽试剂盒HumanPRMT8peptide

Ⅱ型胶原代谢产物C2C试剂盒HumanPRMT1peptide

Ⅱ型胶原C端肽试剂盒RecombinanthumanApo-Hprotein

Ⅱ型胶原试剂盒Anti-BLNKantibody

Ⅱ型肺泡细胞表面抗原试剂盒MouseIgG1,KappaMonoclonal[3-5D1-C9](Allophycocyanin)-IsotypeControl

28S抗核糖体抗体试剂盒Anti-XPFantibody

26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基11试剂盒NativeCyclosporinAprotein

25羟基3试剂盒HumanMMP9peptide

25羟基2试剂盒Anti-MMP9antibody

20S蛋白酶体试剂盒RecombinanthumanHsp20protein

2,3-二甘油试剂盒RecombinantToxoplasmagondiiMIC3protein

2,3Dinor血栓烷B2试剂盒RecombinantT.gondiiToxoplasmagondiiGRA1protein

2型脱酶试剂盒RecombinantT.gondiiToxoplasmagondiiGRA7protein

Ⅰ型前胶原羧基端肽试剂盒RecombinanthumanMCSFprotein

Ⅰ型前胶原N端前肽试剂盒GoatAnti-RabbitIgGFc

测定步骤：

1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样，不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.温浴
1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。