鲍疱疹样病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 返回列表页

产品名称：鲍疱疹样病毒探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Abalone Herpes-like Virus(AbHV)
货号：XG01P3211
分类：荧光定量PCR试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。

实时定量PCR：
①β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释（加水27μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
②反应体系如下：
标准品反应体系
序号  反应物  剂量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  阳性模板上游引物F  0.5μl
3  阳性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  阳性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。

基因反应体系：
序号  反应物  剂量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  内参照上游引物F  0.5μl
3  内参照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待测样品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
③制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃　2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。
PCR特异性：
1.primers design
这是重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些条件：
1)足够长，18～24bp，以保证特异性，当然，不是说越长越好，太长的primer同样会降低特异性，并且降低产量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中间序列要多GC，以增加稳定性；
4)避免3'端GCrich，个BASE不要有GC，或者5个有3个不要是GC。
5)避免3'端的互补，否则，容易造成DIMER；
6)避免3'端的错配；
7)避免内部形成二级结构；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值时不算，但在检测互补和二级结构要加上它们；
9)使用兼并primer时，要参考密码子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用较高的primer浓度(1μM～3μM)；
10)学会使用一种design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。
Rhesus antibody Rh PCANAP2/Prostein  前列腺癌相关蛋白2抗体 规格  0.2ml
Rhesus antibody Rh P-cadherin  P-钙粘附分子抗体 规格  0.1ml
Rhesus antibody Rh PBR/DBI/TSPO  外周苯二氮受体抗体 规格  0.1ml
Rhesus antibody Rh PBOV1  前列腺癌和乳腺癌高表达蛋白抗体 规格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PBLD/MAWBP  MAWD结合蛋白抗体 规格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PBK/TOPK  PDZ连接激酶/T-LAK细胞源蛋白激酶抗体 规格  0.1ml
Rhesus antibody Rh PBEF1(CT)  内脂素/内脏脂肪素(C端抗体) 规格  0.1ml
Rhesus antibody Rh PBEF(NT)  内脂素/内脏脂肪素抗体（N端） 规格  0.1ml
Rhesus antibody Rh PBEF (CT)  内脂素/前B细胞克隆增强因子-2（C端抗体） 规格  0.1ml
Rhesus antibody Rh Paxillin  桩蛋白Paxillin抗体 规格  0.1ml
Rhesus antibody Rh PAX9  配对盒基因9抗体 规格  0.1ml
Rhesus antibody Rh PAX8  配对盒基因8抗体 规格  0.1ml
Rhesus antibody Rh PAX7  配对盒基因7抗体 规格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PAX6  转录因子Pax6抗体 规格  0.2ml
Rhesus antibody Rh PAX5  配对盒基因5抗体 规格  0.1ml用于大肠杆菌的甲基红和VP试验(SN标准) Methyl Red Voges Proskauer Broth MR-VP培养基     
用于大肠菌群的固体平板检测(SN标准) Violet Red Bile Agar 结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA)    
用于肠道菌的柠檬酸盐利用试验(GB标准) Simmons Citrate Agar 西蒙氏枸橼酸盐琼脂     
用于肠道菌计数和肠杆菌科鉴别(MERCK方法) Violet Red Bile Dextrose Agar   肠道菌计数琼脂 (VRBDA)     
用于常用细菌斜面传代及室温保存 Strain Store Medium 菌种保存培养基   
用于饮用水，水源水中总大肠菌群的测定(GB标准) Lactose Peptone Broth 乳糖蛋白胨培养液    
用于运送肠道致病菌标本 Cary-Blair Transport Medium Cary-Blair 氏运送培养基       
营养非常丰富，用各种细菌的基础培养基(AFNOR EP IDF标准) Columbia Blood Agar Base 哥伦比亚血琼脂基础
用于饮用天然矿泉水中大肠杆菌的检验(GB标准) Brilliant Green Lactose Medium 亮绿乳糖培养基   
用于肠道菌的增菌培养(GB、FDA标准) Enterobacteria Enrichment Broth 肠道菌增菌肉汤(EE肉汤)   
用于细菌总数测定 TTC Nutrient Agar TTC营养琼脂   
用于细菌培养 LB Broth LB肉汤    
用于细菌培养 LB Nutrient Agar LB营养琼脂   
用于苯脱氨酶试验 Phenylalanine Deaminase  Medium 苯脱氨酶培养基   
用于大肠杆菌的荧光检测(SN标准) Columbia- MUG Medium 哥伦比亚MUG培养基
用于海生细菌的培养和计数 2216E　Agar 2216E琼脂
用于肠球菌和肠道致病菌的分离培养(Acumedia方法) Enterococcus Agar(Bile Esculin Azide Agar) 肠球菌琼脂(胆盐－七叶苷－叠氮钠琼脂)
鲍疱疹样病毒探针法荧光定量PCR试剂盒用于培养拟杆菌 BDS Medium BDS培养基
用于细菌的综合生化试验 Dextrose Agar 葡萄糖琼脂
用于细菌的糖发酵试验 Andrade’s Carbohydrate Broth Andrade氏糖类肉汤
用于细菌枸椽酸盐试验(SN标准) Korser Citrate Sodium Broth Korser氏枸椽酸盐肉汤
用于大肠菌群的确诊试验(APHA) Endo Agar Endo 培养基
 荧光定量PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。