吉氏巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒 返回列表页

具体计算如下：
RNA溶于40 ?l DEPC水中，取5ul，1:100稀释至495?l的TE中，测得A260 = 0.21
RNA 浓度= 0.21 ×100 ×40 ?g/ml = 840 ?g/ml 或 0.84 ?g/?l
取5ul用来测量以后，剩余样品RNA为35 ?l，剩余RNA总量为：35 ?l × 0.84 ?g/?l = 29.4 ?g
②纯度检测
RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度，比值范围1.8到2.1。
2）变性琼脂糖凝胶电泳测定
①制胶
1g琼脂糖溶于72ml水中，冷却至60℃，10 ml的10× MOPS电泳缓冲液和18 ml的37% (12.3 M)。10×MOPS电泳缓冲液
浓度  成分
0.4M  MOPS，pH 7.0
0.1M  乙酸钠
01M  EDTA
灌制凝胶板，预留加样孔至少可以加入25 ?l溶液。胶凝后取下梳子，将凝胶板放入电泳槽内，加足量的1×MOPS电泳缓冲液至覆盖胶面几个毫米。
②准备RNA样品
取3?gRNA，加3倍体积的甲醛上样染液，加EB于甲醛上样染液中至终浓度为10?g/ml。加热至70℃孵育15分钟使样品变性。
③电泳
上样前凝胶须预电泳5min，随后将样品加入上样孔。5-6V/cm电压下2h，电泳至溴酚兰指示剂进胶至少2-3cm。
④紫外透射光下观察并拍照
28S和18S核糖体RNA的带非常亮而浓（其大小决定于用于抽提RNA的物种类型），上面一条带的密度大约是下面一条带的2倍。还有可能观察到一个更小稍微扩散的带，它由低分子量的RNA（tRNA和5S核糖体RNA）组成。在18S和28S核糖体带之间可以看到一片弥散的EB染色物质，可能是由mRNA和其它异型RNA组成。RNA制备过程中如果出现DNA污染，将会在28S核糖体RNA带的上面出现，即更高分子量的弥散迁移物质或者带，RNA的降解表现为核糖体RNA带的弥散。用数码照相机拍下电泳结果。

客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

产品特点:
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

注意事项:
1. 建议使用新鲜采取的动物组织，若为冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。

2. 试剂Buffer AL若低温保存，易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间，也可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀，混匀后再使用。
3. 电泳检测时，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则，电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带，影响实验结果。
4. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率佳。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
样品RNA的抽提：

①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。

间二硝基苯CPAnti-CD79bantibody[EPR6860]

苯钾AR,99.0%Anti-ATF1antibody[EPR1590(2)]

邻苯二AR,99.5%Anti-ATF1antibody[EPR1590(2)]

醛合次钠97.5%Anti-ATF1antibody[EPR1590(2)]

醛次钠98%Anti-CD97antibody[EPR4428]

叔戊基苯97%Anti-CD97antibody[EPR4428]

双(4-溴苯基)胺98%Anti-CD97antibody[EPR4428]

4-溴苯基苯胺97%Anti-SOX11antibody[EPR8192]

4-溴代三苯胺97%Anti-SOX11antibody[EPR8192]

4-溴-4',4''-二基三苯胺95%Anti-SOX11antibody[EPR8192]

联苄99%Anti-Mesothelinantibody[EPR2685(2)]

2-叔基蒽醌98%Anti-Mesothelinantibody[EPR2685(2)]

4,4'-联苯二97%Anti-Mesothelinantibody[EPR2685(2)]

4,4'-二基二苯胺97%Anti-CD239/BCAMantibody[EPR4165]

3,4-二基二苯胺98%Anti-CD239/BCAMantibody[EPR4165]
吉氏巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒聚己内酰胺粉30-60目Anti-SMC1A(phosphoS957)antibody[EP2857Y]

聚己内酰胺粉60-90目Anti-LEF1antibody[EPR2029Y]

聚己内酰胺粉90-180目Anti-LEF1antibody[EPR2029Y]

橙黄GAR，≥80.0%(HPLC)Anti-LEF1antibody[EPR2029Y]

十八烷AR，98%Anti-Albuminantibody[EPSISR1]

十八烷99%Anti-Albuminantibody[EPSISR1]

十八烷分析标准品，≥99.5%(GC)Anti-Albuminantibody[EPSISR1]

十八烷StandardforGC,≥99.5%(GC)Anti-APBB2antibody

二十八烷AR,≥97.0%(GC)Anti-RPS2antibody

二十八烷standardforGC,≥98.5%(GC)Anti-PFDN1antibody

二十八烷99%Anti-TRAF6BP/TAX1BP1antibody

二十八烷分析标准品,≥99%(GC)Anti-RGS14antibody

锗试剂ARAnti-PLEKHG4antibody

邻菲啰啉盐盐，一水99%Anti-PIP5K3/PIKFYVEantibody

荧光桃红BAR,Dyecontent≥80%Anti-PRIM1antibody

样品cDNA合成:
①反应体系
序号  反应物  剂量
1  逆转录buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆转录酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  总体积  10μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。