双歧杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 返回列表页

荧光定量PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。

产品名称：双歧杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Bifidobacterium spp.
货号：XG01P3329
分类：荧光定量PCR试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。

实时定量PCR：
①β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释（加水27μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
②反应体系如下：
标准品反应体系
序号  反应物  剂量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  阳性模板上游引物F  0.5μl
3  阳性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  阳性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。

基因反应体系：
序号  反应物  剂量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  内参照上游引物F  0.5μl
3  内参照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待测样品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
③制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃　2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。
PCR特异性：
1.primers design
这是重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些条件：
1)足够长，18～24bp，以保证特异性，当然，不是说越长越好，太长的primer同样会降低特异性，并且降低产量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中间序列要多GC，以增加稳定性；
4)避免3'端GCrich，个BASE不要有GC，或者5个有3个不要是GC。
5)避免3'端的互补，否则，容易造成DIMER；
6)避免3'端的错配；
7)避免内部形成二级结构；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值时不算，但在检测互补和二级结构要加上它们；
9)使用兼并primer时，要参考密码子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用较高的primer浓度(1μM～3μM)；
10)学会使用一种design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。

3,5-二羟基苯97%Anti-ProstateSpecificAntigenantibody[3E6]

二苏糖醇99%Anti-PAX5antibody

5,5'二代双(2-硝基苯)98%Anti-ST8SIA1antibody

3,5-二-2-羟基苯磺钠99%Anti-Tbx2antibody[4D6]

3,3'-二氨基联苯胺四盐盐水合物98%Anti-CRELD1antibody

异荧光素96%Anti-PSMAantibody[107.1A4]

(还原型)98%Anti-Claudin1antibody

L-（型）98%MitoBiogenesis™In-CellELISAKit(Fluorescent)

盐胍分子生物学级，99.5%p53MediatedApoptosisWBCocktail

盐胍蛋白变性，99.5%LactateDehydrogenaseB/LDH-BActivityAssay

盐胍AR,99.0%CellCycleIn-CellELISAKit(Fluorescent)

异胍≥99%MembraneFractionWBCocktail

异基-β-D-代半乳糖苷98%Anti-ETS2antibody[OTI1H4]

硝基四唑紫98%Anti-MEK2antibody[OTI1A2]

咪唑99%Anti-GDAP1L1antibody-C-terminal
双歧杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒葡萄糖分析标准品NeddylationAssayKit

葡萄糖高纯级，≥99.5%(GC)E3LigaseAuto-UbiquitylationAssayKit

葡萄糖细胞和昆细胞培养级,≥99.5%SUMOylationAssayKit

葡萄糖植物细胞培养级,≥99.5%UbiquitylationAssayKit(HeLalysate-based)

D-AR,98.0%E2-UbiquitinConjugationKit

D-用于分子生物学,≥98%CellularROS/RNSAssayKit

99%Nucleolar/NuclearStainingKit-Green/RedFluorescence-Cytopainter

雌三醇USPNucleolarStainingKit-GreenFluorescence-Cytopainter

雌酮97%ROS/SuperoxideDetectionAssayKit(Cell-based)

雌酮分析标准品CellularSuperoxideDetectionAssayKit

雌二醇98%ChromatinCondensationAssayKit

雌二醇USP级P4HBInhibitorScreeningAssayKit

雌二醇分析标准品，99.5%ERStainingKit-GreenFluorescence-Cytopainter

98%ERStainingKit-RedFluorescence-Cytopainter

1,3-酮二羧97%GolgiStainingKit-GreenFluorescence-Cytopainter