幽门弯曲杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 返回列表页

荧光定量PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。

产品名称：幽门弯曲杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Campylobacter pybridis
货号：XG01P3389
分类：荧光定量PCR试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。

实时定量PCR：
①β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释（加水27μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
②反应体系如下：
标准品反应体系
序号  反应物  剂量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  阳性模板上游引物F  0.5μl
3  阳性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  阳性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。

基因反应体系：
序号  反应物  剂量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  内参照上游引物F  0.5μl
3  内参照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待测样品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
③制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃　2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。
PCR特异性：
1.primers design
这是重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些条件：
1)足够长，18～24bp，以保证特异性，当然，不是说越长越好，太长的primer同样会降低特异性，并且降低产量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中间序列要多GC，以增加稳定性；
4)避免3'端GCrich，个BASE不要有GC，或者5个有3个不要是GC。
5)避免3'端的互补，否则，容易造成DIMER；
6)避免3'端的错配；
7)避免内部形成二级结构；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值时不算，但在检测互补和二级结构要加上它们；
9)使用兼并primer时，要参考密码子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用较高的primer浓度(1μM～3μM)；
10)学会使用一种design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。

三(苄氧羰基)-L-精氨98%Z-IETD-FMK,Caspase-8inhibitor

D-苏氨99%Z-ATAD-FMK,Caspase-12inhibitor

D-色氨酯盐盐98%Z-ATAD-FMK,Caspase-12inhibitor

L-酪氨酯盐盐98%Z-FA-FMK,CathepsinBinhibitor

S-三苯基-L-半胱氨97%Z-LLY-FMK,Calpaininhibitor

L-色氨醇97%Z-Phe-Phe-FMK,CathepsinBandLinhibitor

3-(三苯基巯基）97.0%JC-1,Mitochondrialmembranepotentialdye

D-色氨98%Z-YVAD-FMK,Irreversiblecaspase-1inhibitor

NA-P-苯磺酰-L-精氨酯盐盐98%Z-YVAD-FMK,Irreversiblecaspase-1inhibitor

D-色氨醇97%QVD-OPhNegativecontrol,caspaseinhibitors

O-(N-琥珀酰亚胺基)-NNN'N'-四基四氟硼脲97%QVD-OPhNegativecontrol,caspaseinhibitors

DL-酪氨98%Dithiothreitol(DTT),reducingreagent

L-色氨酯盐盐98%Ethidiumbromide,fluorescentdyeforDNA/RNAstaining

L-酪氨叔酯99%Oxidizedglutathione(GSSG),Hydrogenacceptor

O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四基脲四氟硼酯98%Daunorubicinhydrochloride,Anthracyclineantibiotic
幽门弯曲杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒硅钾28%溶液SR27897(Lintitript),CCK1receptorantagonist

苯磺酰98%Desformylflustrabrominehydrochloride,alpha4beta2modulator

苯磺酰96%Desformylflustrabrominehydrochloride,alpha4beta2modulator

苯磺酰胺98%AR-R17779hydrochloride,alpha7nAChRagonist

二苯砜97%Methoxy-X04,amyloidbetafluorescentmarker

苯磺钠97%Methoxy-X04,amyloidbetafluorescentmarker

3-溴酯98%DAU5884hydrochloride,M3receptorantagonist

五二锑AR,95%DAU5884hydrochloride,M3receptorantagonist

五二锑99%A779,angiotensin-(1-7)antagonist

五二锑99.95%metalsbasisA779,angiotensin-(1-7)antagonist

五化二锑锑含量:66%A779,angiotensin-(1-7)antagonist

化锑98%Aceclofenac,cyclooxygenaseinhibitor

Symbol采集器MC3000主机电池数据线Aceclofenac,cyclooxygenaseinhibitor

TELNETCE软件Aceclofenac,cyclooxygenaseinhibitor

(R)-(-)-2-扁桃98%Acemetacin,cyclooxygenaseinhibitor