莫氏立克次体探针法荧光定量PCR试剂盒 返回列表页

产品名称：莫氏立克次体探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Rickettsia mooseri
货号：XG01P4035
分类：荧光定量PCR试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。

实时定量PCR：
①β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释（加水27μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
②反应体系如下：
标准品反应体系
序号  反应物  剂量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  阳性模板上游引物F  0.5μl
3  阳性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  阳性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。

基因反应体系：
序号  反应物  剂量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  内参照上游引物F  0.5μl
3  内参照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待测样品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
③制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃　2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。
PCR特异性：
1.primers design
这是重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些条件：
1)足够长，18～24bp，以保证特异性，当然，不是说越长越好，太长的primer同样会降低特异性，并且降低产量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中间序列要多GC，以增加稳定性；
4)避免3'端GCrich，个BASE不要有GC，或者5个有3个不要是GC。
5)避免3'端的互补，否则，容易造成DIMER；
6)避免3'端的错配；
7)避免内部形成二级结构；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值时不算，但在检测互补和二级结构要加上它们；
9)使用兼并primer时，要参考密码子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用较高的primer浓度(1μM～3μM)；
10)学会使用一种design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。

SK-OV-3(人卵巢细胞)5×106cells/瓶×2

JeKo-1(人套细胞淋巴瘤细胞)5×106cells/瓶×2

人胰腺细胞英文名称：PANC-1

明胶培养基/Gelatin Medium细菌明胶液试验250克国产/进口

MS1(小鼠胰岛内细胞)5×106cells/瓶×2gersion

小鼠肺大动脉内细胞*培养基100mL

肌醇测定培养基/Inositol Assay Broth婴幼儿配方食品和粉中肌醇测定250克国产/进口

Plant Protein Extraction Kit/植物蛋白提取试剂盒25次、100次国产gersion

小鼠视网膜色素上细胞*培养基100mL

半固体琼脂/半固体动力培养基/半固体营养琼脂/Semi-Solid Agar细菌动力观察，菌种保存，H抗原位相变异试验等250克国产/进口

SP Rabbit HRP Kit(DAB)/兔Streptavidin-HRP试剂盒(带DAB显色液)3ml、18ml国产

BT-474(人腺导管细胞)5×106cells/瓶×2

M63肉汤/M63 BrothBR250克国产/进口
莫氏立克次体探针法荧光定量PCR试剂盒3,4-基苯HPLC≥98%100mLInterleukin-1 receptor-associated kinase 1,IRAK1 ELISA Kit

N-苄氧羰基-L-天冬氨4-甲酯HPLC≥90%100mLIL1Ra ELISA kit

3',4'-(亚甲基氧)苯乙HPLC≥98%100mLIL-1sRⅡ ELISA kit

3',4'-(亚甲基氧)苯乙HPLC≥98%100mLIL-1sRⅠ ELISA kit

Sodium mesoxalate monohydrateHPLC≥98%100mLInterleukin 1β converting enzyme,ICE ELISA Kit

4-硝基邻苯甲腈HPLC≥98%100mLIL-1β Precursor,Pro-IL-1β ELISA Kit

6-氨基烟HPLC≥98%100mLpro interleukin 1 beta,pro-IL1B ELISA Kit

荧光定量PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。