H9C2大鼠心肌细胞 返回列表页

收到细胞如何处理？

1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。

      描述：(1)公司可提供新鲜或冻存细胞株；(2)细胞株数量约 5×105/瓶；(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

      发货：客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。发货的新鲜细胞还包含:1、发货的T25方瓶中装满50ml左右*培养基；2、说明书及注意事项；3、公司售后服务标准。

      保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜细胞株，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研，不得用于临床应用。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。

细胞培养步骤：

一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备DMEM-H培养基(GIBCO,货号1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基，使293T细胞悬浮生长。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

L-Valine非无菌药品中大肠埃希菌（阳性）anti- ACAA1 antibody人白介素16(IL-16)ELISA试剂盒

L-Tryptophan;L-β-3-Indolyl alanine;(S)-2-AMino-3-(3-indolyl)propionic acid;(S)-(-)-Tryptophan;Trp化妆品中霉菌和酵母菌计数anti- ACAA2 antibody人白介素13(IL-13)ELISA试剂盒

DiMethyl Malonate;Methyl Malonate;Propanedioic acid diMethylester化妆品中菌落总数anti- ACAD10 antibody人白介素12(IL-12/P70)ELISA试剂盒

4-Methylpiperidine;4-Pipecoline; γ-Pipecoline;矿泉水中大肠菌群anti- ACAD8 antibody人白介素12(IL-12/P40)ELISA试剂盒

Diphenylmethane生活饮用水中总大肠菌群anti- ACAD9 antibody人白介素11(IL-11)ELISA试剂盒

SODIUM CHLORIDE生活饮用水中菌落总数anti- ACADL antibody人白介素10(IL-10)ELISA试剂盒

1-Methylnaphthalene生活饮用水中大肠埃希氏菌anti- ACADL-Specific antibody人胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)ELISA试剂盒

1,4-Butanediol diglycidyl ether;冻干粉中肠道侵袭性大肠埃希氏菌（阳性）anti- ACADM antibody人胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒

H9C2大鼠心肌细胞Human PRELP (Proline Arginine Rich End Leucine Rich Repeat Protein) ELISA Kit1号染色体开放阅读框135抗体anti- PC6 antibody乳过物酶(LPO)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human APSA (Anti-Phosphatidyl Serine Antibody) ELISA Kit1号染色体开放阅读框141抗体anti- P-cadherin antibodyγ-谷氨酰转移酶1(γGT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human APA (Anti-Phospholipid Antibody) ELISA Kit1号染色体开放阅读框144抗体anti- PCAF antibody基质金属蛋白酶13(MMP13)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human Anti-AlaRS (Anti-Alanyl-tRNA Synthetase/Anti-PL12-Antibody) ELISA Kit1号染色体开放阅读框146抗体anti- PCBD1 antibody蛋白C(PROC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human TARS (Threonyl tRNA Synthetase, cytoplasmic) ELISA Kit1号染色体开放阅读框150抗体anti- PCBD2 antibody肝素结合性表皮生长因子(HBEGF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human GTF2A1 (General Transcription Factor IIA, Polypeptide 1) ELISA Kit1号染色体开放阅读框156抗体anti- PCBP2 antibody性成纤维细胞生长因子(FGF2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human GUCA2A (Guanylate Cyclase Activator 2A) ELISA Kit1号染色体开放阅读框159抗体anti- PCCA antibody3(KLK3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human INSL3 (Insulin Like Protein 3) ELISA Kit1号染色体开放阅读框162抗体anti- PCCB antibody骨保护素(OPG)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

公司产品采用干冰运输，经过逐步的降温，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暂时停止其生命活动，保存其活性，使您的实验更生动,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

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