人血管内皮细胞提取物 返回列表页

操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

人血管内皮细胞提取物【Human Vascular: Normal Vascular Endothelial Cell Derivatives】
人血管内皮细胞提取物是从人原代血管内皮细胞提取的，人原代血管内皮细胞从正常人血管内皮组织制备。正常人血管内皮组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人血管内皮组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。

注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。

培养步骤：

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

Allyl chloride氧同位素标准水样anti- ELAVL2 antibody仓鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)ELISA试剂盒

Allylmagnesium chloride氧同位素标准水样anti- ELF1 antibody仓鼠状腺结合球蛋白(TBG)ELISA试剂盒

SeleniuM;氧同位素标准水样anti- ELF1 antibody仓鼠组织蛋白酶K(cath-K)ELISA试剂盒

Selenic acid镎-237放射性活度标准溶液anti- ELF2 antibody豚鼠卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)ELISA试剂盒

Tin;粉煤灰硅酸盐水泥成分分析标准物质anti- ELK1 antibody豚鼠白介素4(IL-4)ELISA试剂盒

SODIUM STANNATE TRIHYDRATE矿渣硅酸盐水泥成分分析标准物质anti- ELK1 antibody豚鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒

Cytochrome C火山灰质硅酸盐水泥成分分析标准物质anti- ELK3 antibody豚鼠钩端螺旋体IgG(Lebtospira)ELISA试剂盒

D(+)-Cellobiose;β-Cellobiose;4-O-β-D-Glucopyranosyl-D-glucose;4-(β-D-Glucosido)-D-glucose普通硅酸盐水泥成分分析标准物质anti- ELK4 antibody豚鼠白三烯D4(LTD4)ELISA试剂盒

人血管内皮细胞提取物Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..高尔基体膜相关蛋白5抗体anti- Tom40 antibody防御素β118(DEFβ118)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

freeze-dried高尔基体膜相关蛋白7抗体anti- TOM70 antibodyDerlin 1蛋白(DERL1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Vibrio navarrensis Urdaci et al.高尔基复合体CFR1抗体anti- TOMM34 antibodyDerlin 2蛋白(DERL2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

freeze-dried高尔基体蛋白97抗体anti- TOMM6 antibodyDerlin 3蛋白(DERL3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..高尔基体蛋白A亚基4抗体anti- TOMM7 antibody白喉素合酶(DPH5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Methanosarcina sp.高尔基体外周膜蛋白1抗体anti- TP1 antibodyDR1关联蛋白1(DRAP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Aspergillus terreus Thom, anamorph高尔基体膜蛋白抗体anti- TP1 antibody基二酸脑病变基因1(ETHE1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..高尔基体蛋白6抗体anti- TOPMT antibody延长蛋白4(ELP4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)