小鼠肾小球内皮细胞提取物 返回列表页

收到细胞如何处理？

1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。

小鼠肾小球内皮细胞提取物【Mouse Kidney：Normal Glomerular Derivatives】
小鼠肾小球内皮细胞提取物是从小鼠原代肾小球内皮细胞提取的，小鼠原代肾小球内皮细胞从正常小鼠肾小球组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备小鼠肾小球内皮组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。

细胞培养步骤：

一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备DMEM-H培养基(GIBCO,货号1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基，使293T细胞悬浮生长。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

Sodium molybdate dihydrate定制混标62 标准品anti- Glutamine synthetase antibody不均一核糖核蛋白A2/B1(HNRPA2B1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Molybdic acid定制混标61 标准品anti- GLYAT antibody抗神经元核抗体2型(ANNA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

MonoethanolaMine;EthylolaMine;2-AMinoethanol;β-AMinoethyl alcohol;ColaMine定制混标60 标准品anti- GLYATL1 antibody抗Sa抗体(Anti-Sa)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Morin;Tetrahydroxyflavanol;2′-Hydroxypelargidenolon;Natural yellow 8;Natural yellow 11;C.I. 75660定制混标59 标准品anti- Glycerokinase antibodySp100核抗原(Sp100)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

M-Phthalic acid;Benzene-M-dicarboxylic acid;1,3-Benzenedicarboxylic acid;IPA定制混标58 标准品anti- Glycophorin A antibody抗白蛋白抗体(AAA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

M-Toluic acid;M-Toluylic acid定制混标57 标准品anti- GLYCTK antibody尾加压素2受体(UTS2R)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

M-Toluidine;3- MethylbenzenaMine;M-AMinotoluene;M-Methylaniline;3-AMinotoluene;M-TolylaMine定制混标57 标准品anti- Glypican 1 antibody回肠脂肪酸结合蛋白(FABP6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

MX-POSS定制混标56 标准品anti- Glypican 3 antibody抗表皮细胞基底膜抗体(Anti-EBMZ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

小鼠肾小球内皮细胞提取物Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..HEATR4蛋白抗体anti- ZIC4-Specific antibodyApelin受体(APLNR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Enterobacter cloacae subsp.cloacae (Jord ..热休克蛋白J1抗体anti- ZIM3 antibody血红蛋白α1(HBα1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..铁调节蛋白/铁调素抗体anti- Zinc-alpha-2-glycoprotein antibody血红蛋白ζ(HBζ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..热休克蛋白90α抗体anti- ZIP kinase antibody血红蛋白δ(HBδ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Mycobacterium intracellulare (Cuttino and M ..羟基类固醇脱酶11β2抗体anti- ZIP4 antibody血红蛋白γ1(HBγ1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..组织胺H3受体抗体anti- ZIP7 antibody血红蛋白ε1(HBε1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Homo sapiens, human酸化组蛋白H1抗体anti- ZIP8 antibody血红蛋白γ2(HBγ2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Mus musculus, mouse造血干细胞特异性蛋白抗体anti- ZIPK-Phospho 311Ser antibody血红蛋白α2(HBα2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

公司产品采用干冰运输，经过逐步的降温，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暂时停止其生命活动，保存其活性，使您的实验更生动,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

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