小鼠肾小管平滑肌细胞提取物 返回列表页

操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

小鼠肾小管平滑肌细胞提取物【Mouse Tubular：Normal TubularDerivatives】
小鼠肾小管平滑肌细胞提取物是从小鼠原代肾小管平滑肌细胞提取的，小鼠原代肾小管平滑肌细胞从正常小鼠肾小管组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备小鼠肾小管平滑肌组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。

注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。

培养步骤：

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

MalonaMide;PropanediaMide;EPA Method 1664 LCS Solution 标准品anti- GK3P antibody多巴胺受体D4(DRD4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Malonic acidEPA Method 1664 LCS Solution 标准品anti- GK5 antibodyα2-纤溶酶抑制因子(α2PI)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Malonitrile;Methylene cyanide;DicyanoMethane;Cyanoacetonitrile酸 标准品anti- GKAP1 antibody多巴胺受体D4(DRD4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Mandelic Acid (AS);α-Hydroxyphenylacetic acid;Phenylhydroxyacetic acid;Phenylglycolic acid;α-Hydroxybenzeneacetic acid;dl-Mandelic acid1N Br/ 1N BrO3 标准品anti- GKN1 antibody多巴胺受体D4(DRD4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Manganese Chloride (AS)火锅食品 内标混标(DB 31/2010-2012) 标准品anti- GKN2 antibodyM2-型酮酸激酶(PKM2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Manganese(IV) oxide;Manganese binoxide9种农残定制混标 标准品anti- GLAST antibodyM2-型酮酸激酶(PKM2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Mannitol10种药混标 标准品anti- GLDC antibodyM2-型酮酸激酶(PKM2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

M-Cresol; M-Oxytoluene; M-Hydroxytoluene; M-Methylphenol; 3-Methylphenol;15种药混标 标准品anti- GLI2-Specific antibodyⅡ(F2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

小鼠肾小管平滑肌细胞提取物Mus musculus, mouseH2B组蛋白家族M蛋白抗体anti- ZBTB7B antibody互生蛋白β1(SNTβ1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

frozenH2B组蛋白家族成员W蛋白抗体(丸特异性)anti- ZBTB8A antibodySnurportin 1蛋白(SNUPN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..PWWP域包含蛋白1抗体anti- ZC3H11A antibody纺锤体蛋白1(SPIN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..A型流感病H7N9凝集素抗体anti- ZC3H12A antibody稳定素1(STAB1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Ascosphaera larvis Bissett酸化组蛋白去酰化酶4(Ser246)抗体anti- ZC3H12D antibody红细胞膜蛋白7.2b(STOM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..酸化组蛋白去酰化酶7抗体anti- ZC3H4 antibody硬纤毛蛋白(STRC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Aliivibrio fischeri (Beijerinck) Urbanczyk ..酸化组蛋白去酰化酶4抗体anti- ZC3H7B antibodySurfeit 1蛋白(SURF1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Phialophora melinii (Nannfeldt) Conant, ana ..流感病H3N8血凝素抗体anti- ZC3H8 antibody监理蛋白(SVIL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)