小鼠小脑颗粒细胞提取物 返回列表页

小鼠小脑颗粒细胞提取物【Mouse Brain: Normal Cerebellar Granule Cells Derivatives】
小鼠小脑颗粒细胞提取物是从小鼠原代小脑颗粒细胞提取的，小鼠原代小脑颗粒细胞从正常小鼠脑组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备小鼠小脑颗粒组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。

冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

细胞培养步骤：

一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备DMEM-H培养基(GIBCO,货号1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基，使293T细胞悬浮生长。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

收到细胞如何处理？

1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。
公司产品采用干冰运输，经过逐步的降温，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暂时停止其生命活动，保存其活性，使您的实验更生动,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

Tungstic acid;Orthotungstic acid定制挥发性有机物(VOC)混标(22组分）标准品anti- HK2 antibody神经介素U(NMU)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Turpentine oil;Oil of turpentine定制混标 标准品anti- HK3 antibody接触蛋白关联蛋白1(CNTNAP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Tween 40定制混标 标准品anti- HLA class I/HLA-A antibody泛素激活酶样蛋白(UBE1L)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Tween 65;Polysorbate 65咖因-d9和异醇 标准品anti- HLA class I/HLA-A antibody白蛋白(ALB)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Tween 85;POE(20) sorbitan trioleate;Polysorbate定制混标 标准品anti- HLA class I/HLA-B antibody粘蛋白3(MUC3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Undecyl aldehyde;Undecylic aldehyde;Hendecanal;Aldehyde C11咖因-d9和异醇 标准品anti- HLA class I/HLA-C antibody脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Uracil;2,6-DihydroxypyriMidine;2,4-(1H,3H)-PyriMidinedione;2,4-Dihydroxypyr-iMidine;2,4-DioxopyriMidine;2,4-PyriMidinediol;UraGB3838-2002 24种挥发性有机物混标anti- HLA-A antibodyDickkopf相关蛋白2(DKK2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Uridine;Uracil-3-riboside;1-β-D-Ribofuranosyluracil;Uracil-1-β-D-ribofuranoside;Uracil-3-D-ribofuranoside;Urd;27种VOC混标 标准品(汽车内饰材料TVOC，VDA278)anti- HLA-DMA antibody粘蛋白4(MUC4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

小鼠小脑颗粒细胞提取物driedSEC63域内含蛋白1抗体Canine PCT(procalcitonin) ELISA Kit输出蛋白6(XPO6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..类头状瘤病33 E6蛋白抗体Canine hs-cTnI(High Sensitivity Cardiac Troponin I) ELISA Kit输出蛋白4(XPO4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Trichophyton verrucosum Bodin, anamorph19号染色体开放阅读框38抗体Canine hs-cTnT(High Sensitivity Cardiac Troponin T) ELISA Kit输出蛋白3(XPO3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Roombia truncata Okamoto, Chantangsi, Horak ..肺癌相关蛋白8抗体Canine NT-proBNP(N-Terminal Pro-Brain Natriuretic Peptide) ELISA Kit24-脱还原酶(DHCR24)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Gibberella subglutinans (Edwards) Nelson et ..型肝炎病NS5A抗体Canine MMP2(Matrix metalloproteinase-2) ELISA Kit蛋白O-岩藻糖基转移酶2(POFUT2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

freeze-dried组蛋白H2AX抗体Canine CASP3(Caspase 3) ELISA Kit岩藻糖基转移酶2(FUT2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Salmonella enterica subsp.enterica (e ..组织胺H4受体抗体Canine CASP8(Caspase 8) ELISA Kit岩藻糖基转移酶1(FUT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

freeze-dried5’-三酸聚核苷酸抗体Canine CASP9(Caspase 9) ELISA Kit岩藻糖基转移酶11(FUT11)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)