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操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
人膀胱组织提取物【Human Bladder :Normal Bladder Derivatives】
膀胱是一个储尿器官。在哺乳类,它是由平滑肌组成的一个囊形结构,位于骨盆内,其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌,可以控制尿液的排出。
总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。
蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人膀胱组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。
潜在的应用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA选择性剪接;<3>基因克隆与目标测序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白检测与蛋白质组学;<6>芯片研究与表达图谱。
产品名称 | 人膀胱组织提取物 |
规格 | 详见说明书 |
货号 | XG-X6958 |
注意事项:
1. 接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
培养步骤:
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
Dipropyl o-phthalate;γ2肌动蛋白抗体anti- MAGED4 antibody解整合素金属蛋白酶9(ADAM9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Diisobutyl phthalate激活素受体2A抗体anti- MAGEF1 antibody解整合素金属蛋白酶9(ADAM9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Diisononyl phthalate激活素受体2B抗体anti- MAGEH1 antibody组织转酶(TGM2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
SACCHARIN SODIUM SALT DIHYDRATEATP结合盒转运蛋白2抗体anti- MAGI1 antibody音猬因子(SHH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
2-Iodoanisole胎蛋白抗体anti- MAGIX antibody白介素12(IL12)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
2-CYCLOHEXYLPHENOL肌动蛋白结合蛋白LIM蛋白3抗体anti- MAGOH antibody补体因子D(CFD)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
o-ToluenesulfonaMide酸化CD156b抗体anti- MAGT1 antibody蕈型胆受体M1(CHRM1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
1,2-Diphenylbenzene; o-Diphenylbenzene; 2-Phenylbiphenyl;醇脱酶5抗体anti- MAK antibody白介素10(IL10)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人膀胱组织提取物Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..膀胱癌突变蛋白1抗体Human LTC4S(Leukotriene C4 synthase) ELISA Kit顶体后致密板WW域结合蛋白(PAWP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..膜相关环指蛋白4抗体Human MT-CO3(Cytochrome c oxidase subunit 3) ELISA Kit天冬酰胺內肽酶(LGMN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..肌球蛋白轻链激酶抗体Human COX4I1(Cytochrome c oxidase subunit 4 isoform 1, mitochondrial) ELISA Kit三肽基肽酶Ⅰ(TPP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Porphyromonas asaccharolytica (Holdeman and ..有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白2抗体Human POP7(Ribonucleases P/MRP protein subunit POP7 homolog) ELISA Kit组织蛋白酶A(CTSA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Entamoeba gingivalis (Gros) Brumpt单极纺锤体蛋白激酶1抗体Human COX5A(Cytochrome c oxidase subunit 5A, mitochondrial) ELISA Kit前蛋白转化酶枯草溶菌素1(PCSK1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (B cell); Mus musculus (myeloma ..Mob1同源蛋白MOBKL2C抗体Human CYB5A(Cytochrome b5) ELISA Kit钠碘运输蛋白(NIS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Candida albicans (Robin) BerkhoutMob1同源蛋白MOBKL2B抗体Human CYP1A1(Cytochrome P450 1A1) ELISA KitSmad同源物3(Smad3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Heteroporus biennis (Bulliard : Fries) Laz, ..膜型蛋白酶2抗体Human PPIF(Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase F) ELISA Kit转化生长因子β受体Ⅱ(TGFβR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
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