小鼠肾组织提取物 返回列表页

操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

小鼠肾组织提取物【Kidney: Normal Mouse Kidney Derivatives】
肾位于脊柱两侧，紧贴腹后壁，居腹膜后方。肾属于泌尿系统的一部分，负责过滤血液中的杂质、维持体液和电解质的平衡，后产生尿液经由后续管道排出体外，同时也具备内分泌功能以调节血压。公司科技提供来自新鲜或冷冻小鼠肾组织中高质量的总RNA，PCR准备的条cDNA链，蛋白质及其亚组分。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备小鼠肾组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。

注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。

培养步骤：

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3-Hydroxypyridine;3-Pyridinol;3-Pyridone;β-HydroxypyridineABI1/SSH3BP1蛋白抗体anti- MYO1E antibody醛固酮(ALD)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

3-Methyl-1-pentene酰化组蛋白H1b抗体anti- MYO7A antibody血小板因子4(PF4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

3-Methyl-1-phe3-Methyl-1-phenyl-2-phospholene 1-oxide, 94％氨酰tRNA合成酶2抗体anti- MYO7B antibody热休克转录因子4(HSF4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

3-tert-Butyl-4-hydroxyanisole抑制蛋白激酶C底物抗体anti- MYO9B antibody血小板因子4(PF4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

4(6)-METHYL-2-THIOURACIL核突触蛋白α抗体anti- Myocilin antibody血小板因子4(PF4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

4,4-DDD自噬相关蛋白4B抗体anti- MYOD1 antibody1(VK1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

4,4'-DDT整合素样金属蛋白酶与1型-12抗体anti- MYOD1 antibodyC反应蛋白(CRP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

4-Carboxybenzaldehyde;Terephthalaldehydic acid;Benzaldehydep-carboxylic acidAP2关联激酶1抗体anti- Myoferlin antibody神经肽Y(NPY)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

小鼠肾组织提取物Candida albicans Drug Resistance Panel神经生长因子4/5抗体Human PIK3CA(Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform) ELISA Kit粘蛋白2试剂盒

Mycobacterium parafortuitum Tsukamura et al.核因子2相关因子2抗体Human PIK3CD(Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit delta isoform) ELISA Kit增殖诱导配体试剂盒

Scytalidium dimidiatum (Penzig) Sutton et D ..神经纤毛蛋白1抗体Human GPX2(Glutathione peroxidase 2) ELISA Kit早期生长反应因子1试剂盒

dried神经元特异性烯醇化酶/γ 烯醇化酶抗体Human S1PR1(Sphingosine 1-phosphate receptor 1) ELISA Kit早期前列腺癌抗原2试剂盒

frozen神经营养因子-3前蛋白抗体Human SFRP5(Secreted frizzled-related protein 5) ELISA Kit早期活化抗原CD69试剂盒

Pythium zingiberum Takahashi核受体相关因子-1抗体Human RYR1(Ryanodine receptor 1) ELISA Kit早老素2试剂盒

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..核凋亡诱导因子蛋白1Human PLIN1(Perilipin-1) ELISA Kit早老素1试剂盒

Venturia inaequalis (Cooke) Aderhold, teleo ..酸化受体2A抗体Human OGG1(N-glycosylase/DNA lyase) ELISA Kit再生胰岛衍生1α/胰石蛋白/胰线蛋白试剂盒