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大鼠肾小球组织提取物

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所  在  地上海市

更新时间:2020-10-26 20:48:59浏览次数:117次

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大鼠肾小球组织提取物
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收到细胞如何处理?

1、首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,(所拍照片将作为后续服务依据)。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时,以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞:若细胞生长密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,移除细胞培养瓶内培养基,预留5ml左右继续培养,直至细胞密度达80%左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内,1200rpm离心5min,离心后上清培养基可收集备用,管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时,若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养,补加培养基至5ml;若细胞密度未超过80%,将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。

 产品名称

 规格

 货号

 大鼠肾小球组织提取物

 详见说明书

XG-X7086

大鼠肾小球组织提取物【Kidney:Normal Rat Glomerular Derivatives】
肾小球为血液过滤器,肾小球毛细血管壁构成过滤膜。公司科技提供来自新鲜或冷冻大鼠肾小球组织中高质量的总RNA,PCR准备的条cDNA链,蛋白质及其亚组分。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。

蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备大鼠肾小球组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。

潜在的应用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA选择性剪接;<3>基因克隆与目标测序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白检测与蛋白质组学;<6>芯片研究与表达图谱。

 

细胞培养步骤:

一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(GIBCO,货号1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基,使293T细胞悬浮生长。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
冷冻保存细胞之方法?
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

Human FGF19 (Fibroblast Growth Factor 19) ELISA KitBax抗体anti- NUPL1 antibody脂酰受体(PSR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human FGF21 (Fibroblast Growth Factor 21) ELISA Kit性成纤维细胞生长因子抗体anti- NUPL2 antibody免疫缺陷伴血小板减少综合征蛋白(WASP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human Flt3L (FMS Like Tyrosine Kinase 3 Ligand) ELISA Kit BH3结构域凋亡诱导蛋白抗体anti- NUR77 antibody成纤维细胞生长因子7(FGF7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human FST (Follistatin) ELISA Kit钙激活钾通道蛋白 α 1抗体anti- Nurr1/NR4A2 antibody环加氧酶2(PTGS2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human Hepc (Hepcidin) ELISA Kit TNF家族B细胞激活因子抗体anti- NUSAP1 antibody转录激活因子5(ATF5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human Gas6 (Growth Arrest Specific Protein 6) ELISA Kit多聚合苷酸激酶3酸化酶抗体anti- NVL antibody胆酰转移酶(ChAT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human G-CSF (Granulocyte Colony Stimulating Factor 3) ELISA Kit 布氏杆菌菌体蛋白抗体anti- NWD1 antibody前列腺素D2(PGD2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human GDF15 (Growth Differentiation Factor 15) ELISA Kit 红细胞2,3 - 二酸甘油酸合成酶抗体anti- NXF1 antibody酮酸脱酶β(PDHβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

大鼠肾小球组织提取物NFAT luciferase reporter plasmid (NFAT-Luc荧光素酶报告基因质粒) 神经丛蛋白A3抗体Human ALAD(Delta-aminolevulinic acid dehydRatase) ELISA Kit糖类抗原19-9试剂盒

PPARγ luciferase reporter plasmid (PPARγ-Luc荧光素酶报告基因质粒) ATP酶钙离子转运蛋白PMCA3抗体Human FECH(Ferrochelatase, mitochondrial) ELISA Kit糖类抗原125试剂盒

Progesterone receptor luciferase reporter plasmid (PR萤火虫荧光素酶报告基因质粒) 蛋白质酸酶2调节亚基5C/PP2A-B56-γ抗体Human QPCT(Glutaminyl-peptide cyclotransferase) ELISA Kit糖基化依赖的细胞黏附分子试剂盒

RBP-JK luciferase reporter plasmid (RBP-JK萤火虫荧光素酶报告基因质粒) 蛋白质酸酶2调节亚基5D/PP2A-B56-δ抗体Human DDOST(Dolichyl-diphosphooligosaccharide--protein glycosyltransferase 48 kDa subunit) ELISA Kit糖化血红蛋白A1c试剂盒

RAR luciferase reporter plasmid (RAR萤火虫荧光素酶报告基因质粒) 酸化/抗体Human PDPN(Podoplanin) ELISA Kit糖化低密度脂蛋白试剂盒

Sox2 luciferase reporter plasmid (Sox2 萤火虫荧光素酶报告基因质粒) 细胞膜调控蛋白Paralemmin 1抗体Human MCL1(Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1) ELISA Kit糖化白蛋白试剂盒

SP1 luciferase reporter plasmid (SP1萤火虫荧光素酶报告基因质粒) 端粒酶抑制因子PinX-1抗体Human ADAMTS5(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5) ELISA Kit糖蛋白130试剂盒

SREBP luciferase reporter plasmid (SREBP荧光素酶报告基因质粒) 泌乳素受体抗体Human MEFV(Pyrin) ELISA Kit羰基还原酶[NADPH] 1试剂盒

公司产品采用干冰运输,经过逐步的降温,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暂时停止其生命活动,保存其活性,使您的实验更生动,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

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