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货号 | XG-P3250 | 规格 | 200次反应/1ML |
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包装 | 盒装 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
试剂保存液
货号 | 规格 | 分类 |
XG-P3250 | 200次反应/1ML | 提取试剂盒 |
①Oligo dT
选择Oligo dT时,要求RNA必须有Poly A,所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT,对RNA样品的质量要求较高,不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应,建议推荐使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
②随机引物
适合各种RNA的RT,尤其适合模板丰度很低的情况(比如某个gene表达量很低)。选择随机引物时,第链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板,然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系,一般建议每5µg总RNA的随机引物的用量为50ng,如果每5µg总RNA的随机引物的用量超过250ng,可能会导致小片段产物(<500bp)的增加和长片段、全长产物的降低。
③特异性引物
基因特异性引物(GSP)是某个基因序列的一部分,与模板互补的引物。该引物需要结合目标RNA的已知序列进行设计。由于引物和RNA序列特异性结合,每个目标RNA都需要一套新的基因特异性引物。因此,当分析多种目标时,则需要适用更多的RNA样本。而且不同引物退火温度本来就不相同,所以一般不推荐使用。如需要使用特异性引物,建议对退火温度进行优化。
一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;
二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;
三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成 等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;
四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;
五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;
六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
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