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PCR系列ㅣ动物基因组DNA快速提取试剂盒

时间:2023-4-11阅读:76
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动物基因组DNA快速提取试剂盒适合于从新鲜或冻存组织,如培养的哺乳动物细胞,血液,唾液,毛发(含羽毛),鼠尾及鼠耳等动物组织中快速提取基因组DNA,用于后续的基因 型鉴定等PCR分析检测。

 

操作步骤:

提前准备可设置恒定温度为 55℃和 95℃的热盖金属浴或者PCR仪;提取试剂A在 2~8℃条件下会出现絮状(结晶)沉淀,为正常现象,试剂平衡至室温后可自行消失,不影响使用;使用前取出所有试剂于室温下平衡,颠倒混匀后备用。

1. 消化液的配制:按照样本数量n配制消化液,具体配制方法如下:分别吸取(n× 50µL提取试剂A+n× 2.5µL提取试剂B)加入洁净离心管中,移液器吹吸充分混匀,分装至 0.2mL PCR(离心管)中,每孔 52µL(如样本过多,可提前预制,于 2~8℃短暂保存,2 小时内使用)。

 

2. 不同组织样本基因组DNA的提取:

培养的哺乳动物细胞:将收集到的细胞除去培养液,吸取消化液充分吹吸重悬细胞后,转移至原消化液孔中。

血液/唾液:吸取不超过 10µL的血液或者唾液加入消化液中,移液器吹吸混匀。

毛发(含羽毛):实验前用 75%的乙醇冲洗剪刀和镊子。剪除毛发(含羽毛)的多余部分,仅需保留毛发的根部(羽轴中羽根)区域,并将其尽可能剪碎至消化液中,移液器吹吸混匀。鼠尾/鼠耳:实验前用 75%的乙醇冲洗剪刀和镊子。剪取不超过 0.5cm的小鼠尾尖或耳尖,并将其尽可能剪碎至消化液中,移液器吹吸混匀(一般情况下,重量约为 10mg的 0.5cm长的鼠尾或鼠耳刚好能浸没在含有 50μL消化液的PCR管中)。对于新鲜的鼠尾或鼠耳,建议尽量在剪下鼠尾或鼠耳后 30 分钟内进行基因组DNA提取,否则宜尽快冷冻存放。

 

3. 将样本置于 55℃热盖金属浴或者PCR仪,孵育 10 分钟。

4. 将样本置于 95℃热盖金属浴或者PCR仪,孵育 5 分钟(孵育结束后,组织未消化属于正常现象,不会影响试剂盒的检测效果)。

5. 将上述提取样本置于-20℃冷却 5 分钟,或 4℃冷却 15 分钟以上,以避免气溶胶污染,瞬时离心后取上清立即进行PCR检测(若需长期保存样本,应将未消化的组织去除或将提取物转移到新的离心管中。大部分情况下,提取物 4℃能保存至少 1 个月,-20℃至少能 保存一年)。


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