细胞增殖实验检测方法

细胞增殖与细胞凋亡、细胞周期等是肿瘤研究的重要表型，是分子生物学和药理学研究解决的问题之一。通过在细胞中过表达或干扰某个基因研究基因对细胞增殖能力的影响，进一步研究基因的功能，或对细胞进行药物处理，研究药物对增殖的影响。

1. MTT法：是一种检测细胞存活和生长的方法。该方法已广泛用于生物活性因子的活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济、快捷。

原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其吸光度值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

2. CCK-8法:可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析，常用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。

原理：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-Methoxy PMS的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

3. Brdu: 即5-Bromo-2'-Deoxyuridine,为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期，S期活体注射或细胞培养加入。而后利用抗Brdu单克隆抗体ICC染色显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物双重染色可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。

但由于抗体分子量大，难于掺入并被有效检测。因此BrdU检测需采用DNA酶或HCl或加热使DNA变性。这些处理方法会破坏抗原识别位点，此外许多细胞周期分析的染料都需要dsDNA。这种处理方法也使得同一样本无法同时进行细胞周期分析。对于植物细胞等有细胞壁的分析。采用抗体检测还需要消化细胞壁，细胞壁消化酶常含有一些杂质，会导致检测的可靠性降低，同时BrdU检测则需要进行长时间的孵育--几个小时甚至过夜。

4. EDU: 即5-Ethynyl-2’- deoxyuridine, 是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中。通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。