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原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
施氏油脂线虫PCR检测试剂盒厂家 | Elaeophora schneideriPCR | BK-P9101 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
醇;纯品型;标准品;有证书 CAS 551 * 规格: 0.1g
鼠灵;纯品型;标准品;有证书 CAS 90035-08-8 * 规格: 0.1g
三螨醇;纯品型;标准品;有证书 CAS 115-32-2 * 规格: 0.1g
速威;纯品型;标准品;有证书 CAS 1129-41-5 * 规格: 0.1g
莠去津;纯品型;标准品;有证书 CAS 1610-17-9 * 规格: 0.25g
磷;纯品型;标准品;有证书 CAS * 规格: 0.1g
野百合碱(猪屎豆碱)-对照品;有报告 CAS 315-22-0 * 规格: 20mg
生物素(维生素H);纯品型;标准品;有证 CAS 58-85-5 * 规格: 0.25g
二氢胆固醇 CAS 80-97-7 * 规格: HPLC≥98%;20mg
Picembrin-7-O-(3'- CAS 205370-59-8 * 规格: HPLC≥98%;20mg
细叶远志苷A CAS 139726-35-5 * 规格: HPLC≥98%;20mg
芹菜素-6-C-葡萄糖-8-C-木糖苷 CAS 59914-91-9 * 规格: HPLC≥98%;20mg
β-拉帕醌 CAS 4707-33-9 * 规格: HPLC≥98%;5mg
啡醇 CAS 469-83-0 * 规格: HPLC≥98%;20mg
植酸钙 CAS 3615-82-5 * 规格: HPLC≥98%;20mg
施氏油脂线虫PCR检测试剂盒厂家MiddleBrook 7H11琼脂/MiddleBrook 7H11 Agar分枝杆菌的分离培养250克国产/进口
蛋白胨水(靛基质培养基) 规格: 100g 用途: 供鉴别细菌能否产生靛基质的生化反应
SHZ-88(大鼠腺细胞)酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
荧光假单胞菌 Pseudomonas fluorescens植物杆菌 Lactobacillus plantarum
植物杆菌 Lactobacillus plantarum人结肠氟尿嘧啶耐药株
氢化卵磷脂(大豆)/大豆氢化卵磷脂/氢化大豆卵磷脂/HSPCBR,PC=95%1公斤国产/进口
雄激素受体(AR)重组蛋白 Recombinant Androgen Receptor (AR)
氧化发酵试验培养基/OF培养基/Hugh-Leifson培养基/HLGB细菌的氧化发酵试验250克国产/进口
SW480(人结肠细胞)BC-009(人腺细胞)
大鼠小肠引窝上皮细胞 IEC-6
RK1(大鼠肾细胞)5×106cells/瓶×2