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| 货号 | BK-01S6985 |
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本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供免费代测,7个工作日出结果,提供原始数据!
产品名称 | 规格 | 检测方法 | 货号 |
糖原磷酸化酶b（GPb）测试盒紫外分光光度法 | 50管/24样 | 紫外分光光度法 | BK-01S6985 |
商品介绍：
测定意义: 糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase，GP，EC 2.4.1.1)）是糖原分解代谢的关键酶，使糖原分子从非还原端逐个断开α-1，4-糖苷键移去葡萄糖基，释放1-磷酸葡萄糖，直至临近糖原分子α-1，6-糖苷键分支点前4个葡萄糖基处。GP分为有活性的糖原磷酸化酶a（GPa）和无活性的糖原磷酸化酶b（GPb）两种形式。GPb在一定浓度的腺苷酸（5，-AMP）存在下可被激活。 测定原理： GP催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH，在340nm下测定NADPH上升速率，即可反映GP活性。添加一定浓度的腺苷酸（5，-AMP）时测定GP（GPa和GPb）活性，未添加腺苷酸（5，-AMP）时测定GPa活性，GP活性－GPa活性得到GPb活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 |
试剂组成和配制:
提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。
实验结果判断我有妙招：
1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2～3SD，作为阳性结果的阈值。
3、以P／N值(阳性孔OD值／阴性孔OD值)大于或等于2．1为阳性，P／N值小于2．1，但大于1．5为可疑，P／N小于1．5为阴性。
4、ELISA试剂盒目测定性法：加入底物经酶解和终止反应后，肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照，与阴性对照的颜色接近者，判定为阴性。
与您分享常用不稳定试剂的分类及要求：
① 易挥发、低燃点的试剂要密封，放于阴凉、通风、远离火源处保存。
② 与水蒸气，水发生反应的物质要密封，并远离水源保存。
③ 易与氧气作用的试剂，应将其固体或晶体密封保存，不宜长期存放其水溶液，亚硫酸，氢硫酸溶液要密封存放，钾，钠，白磷更要采用液封形式。
④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存，其相应的溶液较固体更易反应，所以更要注意密封保存。
⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封，放于阴凉通风处保存。
操作步骤：
1. 样品的准备：
a. 细胞样品的准备：收集细胞，用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心，取上清作为待测样品。
b. 组织样品的准备：动物用生理盐水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心，取上清作为待测样品。
d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（P1511）测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大，该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。
e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量，用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如，小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定，可以冰浴保存；如果当天不能完成测定，可以-70 ℃冻存，但建议尽量当天完成测定。
2. 试剂盒的准备工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 参照下表，根据待检测样品(包括标准品) 数量，配制适量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。
注意：由于酶溶液的用量较少且易沉降，必须注意在使用前先轻轻离心一下，然后适当混匀后再使用。
b. 反应启动工作液配制：将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀，按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释，即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。
c. (可选做) SOD 标准品准备：需自备SOD标准品，用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升，参考样品进行检测。说明：为避免稀释后SOD酶活性的下降， SOD标准品宜现稀释现使用；本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品，但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。
1瓶 U27细胞株 U27 低温运输和保存
显色(第二代) 1000ml
100mg 遗传 G-418 Sulfate (Geneticin) 4℃保存
50T 红薯内源基因PCR检测试剂盒 低温运输，-20℃保存
30µL 植物Actin小鼠单抗 Plant Actin Mouse MAb -20℃保存
结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA） Violet Red Bile Agar 250g
2mL 巯基磁珠 Magnetic beads,Sulfydryl 4℃密闭、竖直保存
2 ug pEYFP-mem pEYFP-mem 低温运输，-20℃保存
大豆酪蛋白琼脂（TSA）平板（15cm） 10个/包
1瓶 BNL CL.2细胞株 BNL CL.2 低温运输和保存
LB肉汤颗粒 LB Broth 300ml/袋*10
糖原磷酸化酶b（GPb）测试盒紫外分光光度法TNIP2/ABIN2/TNFAIP3 interacting protein 2 瘤坏死因子α诱导蛋白3相互作用蛋白2抗体 规格: 0.2ml
HIV gp120 艾滋毒抗体 规格: 0.1ml
FASP1/C21orf45 MaFF相关蛋白抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的兔抗牛IgG 规格: 0.1ml
ODZ3/Teneurin 3 固生蛋白3抗体 规格: 0.2mlPhospho-Paxillin (Tyr118) 磷酸化桩蛋白Paxillin抗体 规格: 0.1ml
PPAR-delta/beta D型-过氧化活化增生受体抗体 规格: 0.1mlABHD1 肺α/β水解蛋白1抗体 规格: 0.2ml
Phospho-Lck (Tyr505) 磷酸化淋巴细胞特异性蛋白酪激抗体 规格: 0.1mlResistin 抵抗素抗体 规格: 0.1ml
Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的兔抗牛IgM 规格: 0.1mlLRP/MVP 肺耐药相关蛋白抗体 规格: 0.1ml
C4orf42 4号染色体开放阅读框42抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgG/RBITC 罗丹明标记的兔抗小鼠IgG 规格: 0.3ml
phospho-Tau protein(Thr489) 磷酸化微管相关蛋白抗体 规格: 0.1mlSmoothened/SMO 跨膜蛋白Smoothened抗体 规格: 0.1ml
APG4B/AUTL1 自噬相关蛋白4B抗体 规格: 0.2mlTUSC3 前列抑蛋白3抗体 规格: 0.2ml
FRMD7 FRMD7蛋白抗体 规格: 0.2mlphospho-JunB(Ser259) 磷酸化活化蛋白激B抗体 规格: 0.1ml
Nox4/NADH NADPH氧化4抗体 规格: 0.1mlNF-L/Neurofilament L/Neurofilament 68 低分子量神经丝蛋白抗体 规格: 0.2ml
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