注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
L-组氨酸MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb2-溴-6-氟甲

L-氨酸MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb5-吡-2-羧酸

L-酪氨酸Presenilin 1 AntibodyN-基-哌啶酮

L-酪氨酸(标准品)PSD95 (7E3) Mouse mAb5-溴-2-酚

L-谷氨酸β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2-氟-溴吡啶

L-谷氨酸(标准品)β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)异

L-谷氨酸(sigma)NUT (C52B1) Rabbit mAb2--5-并噻唑

DL-谷氨酸CD11c (3.9) Mouse mAb (APC Conjuga)2--并噻唑

肌氨酸Ingrin β5 (D24A5) Rabbit mAb1-溴-3,二甲氧基烷

甘氨酸-DL-亮氨酸Ingrin β5 (D24A5) Rabbit mAb2',3'-异叉腺苷

L-亮氨酰甘氨酸RalBP1 (I33) Antibody5-酰基-2-甲基吡啶

蒜氨酸(标准品)Nicastrin Antibody3,二酮

L-脯氨酸ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb环戊

DL-缬氨酸ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb2,5-二氟

 L-亮氨酸(标准品) Tuberin/TSC2 (28A7) Rabbit mAb氮杂环丁烷盐酸盐

L-亮氨酸Histone H2A (L88A6) Mouse mAb邻三氟肼

DL-赖氨酸CD14 (61D3) Mouse mAb (APC Conjuga)六水硝酸铥

DL-精氨酸盐酸盐Histone H3 (96C10) Mouse mAb2,二氟

分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA试剂盒SLT/SLT-IIe/O139  猪水肿素(O139)菌体蛋白500 ul

分泌型脂酶A2(sPLA2)ELISA试剂盒SLC39A6  SLC39A6100 ul

肺炎支原体(MP)ELISA试剂盒Slug  锌指转录因子Slug100 ul

肺炎病毒(PV-Ab)ELISA试剂盒SLC40A1/FPN1  细胞膜铁转运蛋白SLC40A1500 ul

肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)ELISA试剂盒SLC44A1/CD92  溶质转运蛋白家族44成员1100 ul

肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)ELISA试剂盒Smad1  细胞信号转导分子Smad-1100 ul

肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)ELISA试剂盒Phospho-Smad1 (Ser206)  酸化细胞信号转导分子Smad-120 ul

肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒Phospho-Smad1/5 (Ser463/465)  酸化细胞信号转导分子Smad-1/5100 ul

肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC1)ELISA试剂盒Smad2/3  细胞信号转导分子Smad-2/3100 ul
猪乙型脑炎病毒PCR检测试剂盒说明书FAM161A蛋白抗体Zolmitriptan中文名：佐米曲普坦别名：分子式：C16H21N3O2

FAM153B蛋白抗体Homopiperazine中文名：高别名：分子式：C5H12N2

FAM150A蛋白抗体Olopatadine hydrochloride中文名：盐酸奥洛他定别名：分子式：C21H24Cl3

FAM21C蛋白抗体Tefovir中文名：泰诺福韦别名：分子式：C9H14N5O4P

FAM13C1蛋白抗体Naftopidil dihydrochloride中文名：盐酸萘哌地尔别名：分子式：C24H30Cl2N2O3
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。