猪伪狂犬gE鉴别ELISA诊断试剂盒使用说明书

 猪伪狂犬gE鉴别ELISA诊断试剂盒使用说明书

【用途】

猪伪狂犬病毒gE鉴别ELISA诊断试剂盒用于检测猪血清中抗伪狂犬病毒gE蛋白的抗体。用于区别临床野毒感染猪和用gE基因缺失疫苗免疫的猪。

【简介】

试剂盒由抗原包被的微孔板，酶标羊抗猪IgG及其它试剂制成，应用间接ELISA原理检测猪血清中抗伪狂犬病毒gE蛋白的抗体。

【原理】

本试剂盒是采用猪伪狂犬病毒gE基因的工程表达产物包被微孔板，在试验中，按操作步骤加入对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有抗猪伪狂犬病毒gE蛋白的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入H₂SO₄溶液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定各反应孔中的OD值,建议用双波长检测（450nm、630nm）。

【试剂盒主要成分】

【用前制备】

仔细阅读说明书，所有试剂在4℃条件下保存，禁止结冰，如果干燥带发红不能使用，不用的孔必须密封好以防潮湿对平板有害，不要是平板接触强光和氧化物。不要使用过期的成分或混合使用成分。注意加样和冲洗，以确保试验的度和准确度。操作过程中注意安全，要带手套，终止液含有硫酸使用要小心。所有的废液要经过处理和净化。

【未提供的需用材料】

微量加样器、加液槽、蒸馏水、恒温箱、酶标仪、吸水纸

【注意事项】

1、试剂盒使用前各试剂应平衡至室温。

2、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用。

3、注意防止试剂盒各组分受污染。

4、微孔板拆封后避免受潮或沾水（每次将剩余的微孔板用封口袋扎紧后尽快置于4℃）。

【试剂配制】

洗涤液：用蒸馏水稀释20倍浓缩洗涤液，混匀。

【操作步骤】

1、  取预包被的微孔板（根据样品多少，可拆开分次使用），用样品稀释液将待检样品40倍稀释后加入板孔中，每孔加100μl。阴、阳性对照（阴、阳性对照不稀释）各设2孔，每孔100μl。另设一空白对照孔，空白对照孔加100μl稀释液。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30min。

2、  甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板5次，300μl/孔，每次静置60秒倒掉，zui后一次在不掉屑干净吸水纸上拍干。

3、  每孔加酶标二抗（抗猪IgG-HRP结合物）100μl，置37℃温育30min。

4、  洗涤5次，方法同2。

5、  每孔加底物A液、B液各50μl，混匀，37℃避光显色10分钟。

6、  每孔加终止液50μl，混匀，置酶标仪450nm处测各孔OD值（建议用双波长450nm、630nm）。10分钟内测定结果。

【结果判定】 

1、  阴性对照：正常情况下，阴性对照孔OD₄₅₀值≤0.1；

2、  阳性对照：正常情况下，阳性对照孔OD₄₅₀值≥0.4；

3、  临界值（C.O.）的计算：临界值=0.15+阴性对照孔均值；所有阴性、阳性对照和样品的OD₄₅₀值均须减去空白平均值后作为计算值；阴性对照孔OD₄₅₀值大于0.10时应舍弃，如所有阴性对照孔OD₄₅₀值都大于0.10时须重复实验；阴性对照孔低于0.05时以0.05计算。

4、  结果判定：检测标本OD₄₅₀值≥临界值判定为本试验阳性；检测标本OD₄₅₀值＜临界值判定为阴性。

【规格】 96孔×2块   

【有效期】12个月  

【贮存】 2-8℃避光保存  

【生产日期】 见试剂盒外包装