喹乙醇（olaquindox）快速检测试剂盒说明书

 喹乙醇（olaquindox）快速检测试剂盒说明书

一、 原理 

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测等样本中的喹乙醇，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的喹乙醇和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗喹乙醇抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的喹乙醇含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出喹乙醇含量。

二、 试剂盒技术指标：

试剂盒灵敏度：  1ppb

样本检测下限：

组    织—————————————1ppb

饲    料————————————100ppb

交叉反应率：

喹乙醇 ———————————————  100%

卡巴多 ——————————————  ﹤7%

回收率：

组   织————————————80%±10%

饲   料————————————80%±15%

三、试剂盒组成

1、    微量测试孔：每条8孔，一板12条

2、    标准溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、1ppb、3ppb、9ppb、27ppb、81ppb

3、    酶标记物  12ml  ………………红色帽

4、    抗体工作液 7ml  ……………… 蓝色帽

5、    底物A液   7 ml…………………白色帽

6、    底物B液   7 ml…………………黑色帽

7、    终止液     7 ml…………………黄色帽

8、    20X浓缩洗涤液40 ml……………白色帽

9、    2X浓缩复溶液  50 ml……………透明帽

四、 所用仪器、试剂

具备的仪器：微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器 、振荡器、离心机、恒温箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管

微量移液器：单道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道250µl

试     剂：乙腈、正己烷

五、样本前处理步骤

样本处理前须知

处理任何样本时，都必须注意：

（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。

（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

（a）组织（猪肝、猪肉、鱼、虾等）样本的处理方法

1、    称2±0.05g组织，加入10ml无水乙腈，振荡5min,室温4000r/min以上离心10min。

2、    取上清液5ml于50℃氮气或空气下吹干。

3、    用2ml正己烷溶解干燥物，用1ml已稀释

好的复溶液（2X浓缩复溶液与去离子水1:1

稀释）充分混合30s；4000r/min以上

离心5min。

4、    取50µl进行分析。

样本稀释倍数：1

（b）饲料样品的处理方法

1、    将饲料样品研碎，称1.0±0.05g研碎的饲料

样品，加入2g Al₂O₃ ，然后加入5ml乙腈，

剧烈震荡2min，室温避光静置8min，取出

上清液50ul与已稀释好的复溶液950ul （2X

浓缩复溶液与去离子水1:1稀释），混匀，

25℃，4000r/min,；离心5min。

2、    取50ul上清进行分析。

样本稀释倍数:100

六、酶标免疫分析程序

1、    将所需试剂从冷藏环境中取出，置室温（20-25℃）平衡30min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、    按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。

3、    配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。

4、    编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5、    加标准品/样本50µl/孔到各自的微孔中，再加入50µl/孔的抗体工作液，用盖板膜盖板，轻轻振荡混匀，37℃环境反应30min 。

6、    取出微孔板，甩出孔内液体，用洗涤液按250μl /孔洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，用吸水纸拍干.

7、    酶标记物：加入酶标记物100µl/孔，用盖板膜封板，37℃环境中反应30min。取出酶标板，如前述洗板5次。

8、    显色：每孔先加入底物液A液50µl，再加B液50µl，轻轻振荡混匀，37℃环境中避光显色15min。

9、    测定：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，在5min内读完数据），测定吸光度值（OD值）。

七、结果判定

结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含喹乙醇的含量成负相关。

1、    粗略判定：

用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出样本所含喹乙醇浓度范围（ng/ml）。假设样品1的吸光度值为0.313，样品2的吸光度值为1.032，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.892；1ppb为1.501；3ppb为1.175； 9ppb为0.751； 27ppb为0.421； 81ppb为0.198。则样品1的浓度范围是27ppb-81ppb；样品2的浓度范围是3ppb-9ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中喹乙醇实际浓度。

2、  定量分析：

所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以*个标准（0标准）的吸光度值（B₀）再乘以100%，即百分吸光度值。

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B₀—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值

以标准品百分吸光率为纵坐标，以喹乙醇标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中喹乙醇实际浓度。

若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。

八、注意事项

1、    用前将所有试剂温度回升至室温20-25℃。

2、    用之后立即将所有试剂放回2-8℃冰箱。

3、    在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是ELISA测定程序中的要点。

4、    所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。

5、    室温低于25℃或试剂及标本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。

6、    在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

7、    混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。

8、    反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

9、    不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。

10、不用的微孔板放进自封袋重新密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

11、显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5时，表示试剂可能变质。

12、该试剂盒*反应温度为37℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

九、储藏条件和保质期

储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。

保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。

提示：酶标板真空包装袋若有漏气，酶标板仍然正常有效，不影响实验结果，请放心使用。