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武汉尚恩生物技术有限公司
UMNSAH/DF-1细胞是起源于10日龄的ELL-0鸡蛋的鸡细胞株,自发永生化。分离原代鸡胚成纤维细胞并在培养液中培养,传代直到衰老;在衰老过程中离心以保持细胞培养在30%到60%满;不衰老的克隆进行鉴定并传代不少于30次。
一、细胞基本属性 | |
细胞名称 | 鸡胚成纤维细胞 |
细胞别称 | UMNSAH/DF-1; UMNSAH-DF-1; UMNSAH-DF 1; UMNSAH-DF1; UMNSAH/DF#1; DF-1; DF1; Douglas Foster-1 |
细胞货号 | SNL-006 |
细胞种属 | 鸡 |
生长情况 | 贴壁 |
培养条件 | H-DMEM+10%FBS+1%双抗 |
培养环境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
二、细胞培养操作 | |
换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基; 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s,吸走润洗的PBS; 3.T25瓶加1ml左右*,轻轻晃动培养瓶以使*铺匀瓶底细胞层; 4.将培养瓶放入37度培养箱消化; 5.消化到细胞间隙变大,但未*脱落时加2-3ml*培养基终止*消化; 6.混匀细胞,900rpm离心3-5min,弃上清; 7.加新的*培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里; 8.补足*培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 不同品牌*消化时间差别较大,注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、细胞冻存操作 | |
冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手*)或92%*培养基+8%DMSO(高手*); |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
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