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胱天蛋白酶Caspase 系列产品实验方案

时间:2023/8/15阅读:51
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产品型号:13406.13407.13408.13409

FITC-C6(C3)-DEVD-FMK能提供简便灵敏的方法对活细胞中对的caspase进行检测。FITC-C6(C3)-DEVD-FMK在凋亡细胞中具有通透性,性和不可逆结合的caspase-3的特点,是带有FITC荧光标记的caspase-3抑制剂。FITC标记能直接通过荧光显微镜,流式细胞仪或者荧光酶标仪测定的Caspase。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的胱天蛋白酶Caspase 3/7荧光底物 FITC-C6(C3)-DEVD-FMK 绿。

实验方案

操作方法

以下协议仅提供指导,应根据您的特定需求进行修改。

使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的常规解决方案胱天蛋白酶测定

1.在DMSO中准备10 mM的储备溶液。

2.如下准备2X半胱天冬酶底物(50 µM)分析溶液:50 µL底物原液,100 µL DTT(1M),400 µL EDTA(100 mM),10 mL Tris Buffer(20 mM),pH = 7.4。

3.将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合,并在室温下孵育至少1小时。

4.使用荧光酶标仪监测荧光,或使用酶标仪监测吸光度。 

使用细胞渗透性FMK Caspase探针的细胞Caspase测定

1.在DMSO中准备2-5 mM的储备溶液。

2.根据需要处理细胞。

3.通过用20 mM Hepes缓冲液(HHBS)在Hanks中稀释DMSO储备溶液(来自步骤2.1),制备2X渗透性半胱天冬酶底物(20 µM)分析溶液。

4.将等体积的处理过的细胞与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合(来自步骤2.3),并在37°C,5%CO2的培养箱中孵育细胞至少1小时。

5.用HHBS清洗细胞至少一次。

6.通过流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。 

使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞半胱天冬酶测定(仅适用于#13470-13476)

1.通过向小瓶中加入50 µL DMSO制备250X储备液。

2.根据需要处理细胞。

3.以1:250的比例将250 X DMSO储备溶液添加到细胞溶液中(例如2 µL至500 µL细胞),并将细胞在37°C,5%CO2的培养箱中孵育1小时。

4.用HHBS清洗细胞至少一次。

5.通过流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

 


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