FITC-xtra 异硫氰酸荧光素具有与FITC几乎相同光谱特性，温和缀合条件下比FITC的缀合产率高。在相同条件下，FITC-xtra抗体缀合物提供比FITC标记的缀合物的信号/背景比高得多。
图1.将HeLa细胞与带有(Tubulin+)或不带有(Tubulin-)的小鼠抗微管蛋白抗体以及山羊抗小鼠IgG孵育，然后分别用FITC-Xtra链霉亲和素偶联物(绿色，左)或FITC-链霉亲和素偶联物(绿色，右)染色。细胞核用Hoechst 33342(蓝色，Cat#17530)染色。
FITC-xtra 异硫氰酸荧光素适用范围
用于标记蛋白质
FITC-xtra 异硫氰酸荧光素优势
1.光稳定性好
2.荧光不受pH(4-10)影响
FITC-xtra 异硫氰酸荧光素实验方案
（该标记方案适用山羊抗小鼠IgG与FITC-xtra的偶联物）
准备蛋白质储备溶液（溶液A）
将100μL反应缓冲液(例如，1M碳酸钠溶液或pH~9.0的1M磷酸盐缓冲液，)与900μL目标蛋白溶液(例如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml)混合，得到1 mL蛋白标记储备液。
准备染料储备溶液（溶液B）
将无水DMSO加入到FITC-xtra小瓶中以制备10-20mM储备溶液，通过移液或涡旋混合均匀。
注：在开始缀合之前准备染料储备溶液(溶液B)随配随用，保证使用的溶液的新鲜。染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。溶液B可以在不受光照和潮湿的情况下储存在冰箱中两周。
准备所需的蛋白质缀合物
注：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能对其结合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 - 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。
1.使用10：1摩尔比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)作为起始点：将5μl染料储备溶液(溶液B，假设染料储备溶液为10 mM)加入到蛋白质的小瓶中溶液(95μl溶液A)，有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。
注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10%。
2.进行缀合反应。在有效摇动下将适量的染料储备溶液(溶液B)加入到蛋白质溶液(溶液A)的小瓶中。继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。
3.重复#3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1; 如果需要，分别为15：1和20：1。
4.使用预制的旋转柱或其他技术纯化所需的缀合物。
5.计算上述4种缀合物的染料/蛋白质比(DOS)。
