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花青染料通常表现出非常大的摩尔吸收率（约150000至300000M-1 cm-1）以及适度的量子产率，从而产生及其明亮的荧光信号。事实证明，花青在许多领域都非常有用，包括生物成像、细胞学、荧光技术和分析化学等，对于某些生物学应用，花青可以有利地替代其他常规染料，它们也可以应用在各种生物学。
常见的花青染料
花青染料中常使用的是发黄绿色荧光的Cy3(Ex:550nm,Em:570nm)和发红色荧光的Cy5(Ex:650nm,Em:670nm)。由于它们具有少量光谱重叠，Cy3和Cy5通常组合为2色检测。Cy3可通过各种荧光仪、成像仪器和具有TRITC标准滤波片的显微镜来检测。由于Cy5消光系数高，它以成为远红色荧光染料的流行替代品。
图为Cy3(左)、Cy5(中)、Cy7(右)的激发和发射光谱
表一.花青染料的光谱特性
花青染料 | 激发光线(nm) | Ex/Em(nm) | 滤波片组 | 消光系数 | 荧光量子产率 |
Cy3 | 532 | 554/568 | Cy3/TRITC | 150000 | 0.15 |
Cy5 | 633-647 | 650/669 | Cy5 | 250000 | 0.27 |
Cy7 | 730 | 754/778 | Cy7 | 250000 | 0.3 |
磺化与非磺化花青染料
磺化与非磺化花青染料具有非常相似的荧光特性，在许多应用中可以互换使用。它们之间的差异主要在于溶解度。磺化的为水溶性，非磺化的则为脂溶性。
表2.磺化与非磺化花青的比较
Cy3 | Cy5 | Cy7 | ||||
形式 | 磺化 | 非磺化 | 磺化 | 非磺化 | 磺化 | 非磺化 |
Ex/Em(nm) | 554/568 | 650/669 | 754/778 | |||
滤波片组 | Cy3/TRITC | Cy5 | Cy7 | |||
消光系数 | 150000 | 140000 | 250000 | 230000 | 250000 | 250000 |
荧光量子产率 | 0.10 | 0.07 | 0.27 | 0.16 | 0.12 | 0.2 |
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